小牛凝乳酶基因在大肠杆菌中可溶性表达研究
THE RESEARCH OF CALF-CHYMOSIN GENE SOLUBLE EXPERSSION IN E.coli
摘要
Abstract
目录
第1章 绪论
1.1 课题背景
1.1.1 前言
1.1.2 凝乳酶的来源与种类
1.1.3 牛凝乳酶的化学性质与结构
1.2 凝乳酶发展概况
1.3 重组凝乳酶发展概况
1.3.1 重组凝乳酶的原核表达
1.3.2 重组凝乳酶的真核表达
1.3.3 重组凝乳酶的生产和应用
1.4 重组凝乳酶存在的问题
1.5 重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达
1.5.1 大肠杆菌表达系统
1.5.2 包涵体形成的原因
1.5.3 提高蛋白可溶性表达的方法
1.6 课题来源及研究意义
1.7 研究主要内容
第2章 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 菌种和质粒
2.1.2 药品和试剂
2.1.3 培养基
2.1.4 溶液
2.1.4 仪器和设备
2.1.6 主要分子生物学软件
2.2 实验方法
2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备
2.2.2 含目的基因重组质粒的提取
2.2.3 目的基因的扩增
2.2.4 扩增产物的纯化/回收
2.2.5 目的基因的克隆
2.2.6 目的基因的转化
2.2.7 目的基因的表达
第3章 重组表达载体的构建
3.1基因扩增
3.2 载体构建
3.2.1克隆载体的构建
3.2.2表达载体的构建
3.3 本章小结
第4章 基因的表达
4.1 表达结果分析
4.1.1 初步检测
4.1.2 IPTG浓度优化
4.1.3 可溶性分析
4.2 诱导条件对蛋白可溶性表达的影响
4.3 表达载体对蛋白可溶性表达的影响
4.3.1 培养温度对表达的影响
4.3.2 融合标签对表达的影响
4.4 宿主菌对蛋白可溶性表达的影响
4.5凝乳酶活性检测
4.6 本章小结
结论
展望
参考文献
附录
附录1 CYM基因密码子及对应蛋白序列
附录2 CYM基因测序结果
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致谢