左旋四氢巴马汀对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织的保护作用

摘要

目的:证实左旋四氢巴马汀（L-tetrahydropalmatine, L-THP）对脑缺血再灌注损伤的保护作用，探讨其抗脑缺血再灌注损伤的作用机制，拓展该药的研究和应用范围，为其临床预防和治疗缺血性脑血管疾病提供实验基础和理论依据。
　　方法:采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉（middle cerebral artery, MCA）建立大鼠局灶性脑缺血实验模型，大鼠于缺血前30 min腹腔注射不同剂量（5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg）L-THP及阳性对照药尼莫地平。观察各组脑缺血再灌注损伤后动物的神经行为学评分及脑梗死体积改变；免疫组化染色法分别检测抑癌基因p53、细胞色素C（cytochrome C, cyt C）及诱导型一氧化氮合酶（induced nitric oxide synthase, iNOS）的表达改变；蛋白免疫印迹（Western Blot）法分别检测半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）及环氧化酶-2（cyclooxygenase-2, COX-2）的表达情况；TUNEL法检测凋亡细胞的数量改变。
　　结果:1.神经行为学评分：假手术组无神经行为改变，L-THP5、10、20 mg/kg组及尼莫地平组神经行为学评分明显低于缺血再灌注组（2.10±0.64、1.95±0.60、1.80±0.70、1.75±0.72 vs2.70±0.67，P<0.05），各用药组间比较无显著差异。2.脑梗死体积百分比：假手术组未见梗死灶， L-THP5、10、20 mg/kg组及尼莫地平组脑梗死体积百分比（％）分别为31.87±2.64、24.76±3.21、21.57±2.91、22.75±3.41，明显小于缺血再灌注组（35.70%±2.79%）（P<0.05）。3. p53：缺血再灌注组、L-THP5、10、20 mg/kg组及尼莫地平组阳性细胞率（%）分别为：65.37±9.82、51.76±7.96、38.95±8.25、27.70±8.06、30.75±9.20。各用药组阳性细胞率均较缺血再灌注组降低（P<0.05）。L-THP20 mg/kg组阳性细胞率较L-THP5、10 mg/kg组显著降低（P<0.05），与尼莫地平组无差异。4. iNOS：与缺血再灌注组相比，L-THP5、10、20 mg/kg组及尼莫地平组iNOS阳性细胞率（%）均明显下降（46.65±8.03、39.14±11.10、28.74±7.84、26.39±8.32 vs61.14±7.65，P<0.05），L-THP20 mg/kg组较L-THP5、10 mg/kg组显著降低（P<0.05）。5. cyt C：除L-THP5 mg/kg组外， L-THP10、20 mg/kg组及尼莫地平组阳性细胞率（%）均较缺血再灌注组显著降低（40.24±8.93、26.29±10.68、29.65±11.61 vs59.76±10.11，P<0.05）。6. COX-2：各用药组COX-2蛋白的表达量较缺血再灌注组降低。7. caspase-3：假手术组未见到活化的caspase-3表达，缺血再灌注组其表达明显增高，各用药组可以抑制活化caspase-3的蛋白表达。8.凋亡细胞：L-THP5、10、20 mg/kg组及尼莫地平组TUNEL阳性细胞率（%）均较缺血再灌注组明显下降（53.94±9.43、41.90±8.78、31.99±7.49、29.61±9.03 vs68.09±8.97，P<0.05）； L-THP20 mg/kg组和尼莫地平组组间比较未见差异，与L-THP5 mg/kg、10 mg/kg组相比，阳性率均明显下降（P<0.05）。
　　结论:1. L-THP对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用；
　　2. L-THP可以抑制脑缺血再灌注损伤所引发的神经细胞凋亡；
　　3. L-THP可能通过抑制p53、cyt C、iNOS、caspase-3及COX-2蛋白的表达对脑缺血再灌注损伤起到保护作用。

目录

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中文摘要

英文摘要

引言

材 料 和 方 法

1.材料

2．实验方法

3. 统计学处理

结果

1. L-THP对大鼠神经行为学评分的影响

2. L-THP对大鼠脑梗死体积百分比的影响

3. L-THP对p53蛋白表达的影响

4. L-THP对iNOS蛋白表达的影响

5. L-THP对cyt C蛋白表达的影响

6. L-THP对COX-2蛋白表达的影响

7. L-THP对caspase-3蛋白表达的影响

8. L-THP对神经细胞凋亡的影响

讨论

结论

参考文献

致谢

附 录 A英 文 缩 略 词 表

附 录 B在校期间已发表的文章

附录C 综述: 左旋四氢巴马汀抗脑缺血再灌注损伤的研究进展