MARVELD1与组蛋白H3乙酰化及H4甲基化相互关系的研究

摘要

本实验室前期研究发现MARVELD1(MARVEL domain containing1)为一个候选的肿瘤抑制基因，定位于人类10号染色体长臂2区4带2亚带（10q24.2），其mRNA全长3238bp，共有两个外显子，编码蛋白分子量为18.9 kD，具有抑制肿瘤增殖并导致细胞周期阻滞的作用。前期研究结果提示，MARVELD1可能与组蛋白及其修饰形式存在相互作用，本课题采用过表达MARVELD1的肺癌A549及肝癌HepG2细胞系，并在A549/ MARVELD1及 HepG2/ MARVELD1细胞中进行MARVELD1/V5融合蛋白与组蛋白及其修饰形式的共定位分析。结果表明MARVELD1与组蛋白H3.1，H4，H4 K20 me1以及H4 K20 me3在有丝分裂前期存在共定位。为进一步研究MARVELD1与组蛋白及其修饰形式的相互关系，本课题构建 pGEX-4T-2/MARVELD1重组体，并在 Rosetta（DE3）大肠杆菌中成功原核表达GST/MARVELD1融合蛋白，应用GST pull-down技术体外验证MARVELD1与组蛋白及其修饰形式的相互关系。实验结果显示MARVELD1与组蛋白H3.1以及乙酰化组蛋白H3 K9/14不存在相互作用，而在组蛋白H4中，MARVELD1与组蛋白H4 K20 me1存在相互作用，进一步的免疫共沉淀实验也证实MARVELD1与组蛋白H4 K20 me1的相互作用。但是MARVELD1与非修饰组蛋白H4 K20和组蛋白H4 K20 me3不存在相互作用。
　　另外，本课题应用Western blotting技术，在过表达MARVELD1的A549细胞系中分析MARVELD1对组蛋白及其修饰形式的影响。结果表明MARVELD1的高表达导致乙酰化组蛋白H3 K9/14的表达下调，非修饰组蛋白H4 K20和组蛋白H4 K20 me3的表达上调。同时，对于与MARVELD1相互作用的组蛋白H4 K20 me1，MARVELD1的高表达导致其表达降低。分析得到MARVELD1可能通过其它途径影响组蛋白的表达。
　　鉴于组蛋白H4 K20 me1在细胞周期、基因组的稳定、染色质的凝聚压缩和异染色质的形成、基因的转录调控以及 X染色体的失活等方面起到重要作用，本课题的研究结果提示MARVELD1的功能可能与其相关，也为MARVELD1的进一步研究奠定了基础。

目录

MARVELD1与组蛋白H3乙酰化及H4甲基化相互关系的研究

STUDY ON THE INTERACTION BETWEEN MARVELD1 AND ACETYLATED HISTONE H3 AS WELL AS METHYLATED HISTONE H4

摘 要

ABSTRACT

目 录

第一章 绪论

1.1 课题背景及研究的目的和意义

1.2 国内外在该方向的研究现状及分析

1.3 课题来源

第二章 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 本章小结

第三章 MARVELD1与组蛋白H3乙酰化的相互关系

3.1 引言

3.2 MARVELD1与组蛋白H3.1相互关系的分析

3.3 MARVELD1与乙酰化H3 K9/14相互关系的分析

3.4 讨论

3.5 本章小结

第四章 MARVELD1与H4甲基化的相互关系

4.1 引言

4.2 MARVELD1与H4 K20甲基化的共定位分析

4.3 MARVELD1对H4 K20甲基化的影响

4.4 MRVELD1与H4 K20甲基化相互作用的分析

4.5 讨论

4.6 本章小结

结 论

展 望

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

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学位论文原创性声明

学位论文使用授权说明

致 谢