外源因素对红松查尔酮合成酶基因表达和多酚含量的影响

摘要

红松中富含有多种生物活性物质，具有重要的科学研究和实际应用价值。近些年来，红松生物活性相关的研究工作不断加强，但与活性物质代谢相关的研究还处于起步阶段。尤其是红松中多酚代谢活动相关研究还未完全开展。本课题研究了不同外源因素对红松代谢活动的影响，采用Folin-酚法测定红松中多酚含量，利用实时荧光定量PCR技术检测CHS基因的表达量，使用双向电泳技术和质谱技术进行蛋白质组学研究。主要取得如下成果：
　　（1）研究了不同外源因素对红松多酚含量的影响。使用Folin-酚法测定多酚含量。研究发现：紫外照射时间为4h时，红松不定芽中多酚含量最，达到39.41mg/g；培养温度为20℃时，红松多酚含量最高，达到43.25mg/g，培养温度为10℃时，多酚含量达最低值21.37mg/g；不同季节红松松针多酚含量顺序：秋季＞夏季＞冬季＞春季，秋季多酚含量为36.12mg/g，春季多酚含量为24.58mg/g。说明紫外光照、培养温度和季节都能对红松多酚的含量造成影响。
　　（2）研究了不同外源因素对查尔酮合成酶基因表达的影响。采用RT-PCR技术检测红松中CHS基因的表达。研究发现，紫外、温度和季节都能影响CHS基因的表达：以紫外照射0h的实验组为内标，紫外照射2h时，CHS基因的表达量达最高值，为内标的3.87倍，紫外照射8h时，CHS基因的表达量降低至内标的0.16倍；以培养温度10℃的实验组为内标，培养温度为20℃时，CHS基因的表达量最高，为内标的3.10倍；不同季节红松松针CHS基因表达量顺序为：夏季＞秋季＞冬季＞春季，以春季实验组为内标，夏季的CHS基因的表达量为内标的3.03倍。通过红松多酚含量和CHS基因表达量对比研究，发现基本变化规律：红松多酚含量随CHS基因的表达量升高而增加。
　　（3）研究了不同外源因素对红松总蛋白表达的影响，通过双向电泳技术分离鉴定红松总蛋白。结果表明紫外光照、温度和季节对蛋白表达量影响较大，还出现一些蛋白点的极端缺失。从各组中选取差异显著蛋白点进行MALDI--TOF-MS分析：紫外实验组中ssp5701是核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶，ssp6501是蛋氨酸合成酶；温度实验组中ssp3804是热休克蛋白70，ssp7701为烯醇化酶；季节实验组中ssp4602是核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶活化酶，ssp3305是依赖脱落酸的水分胁迫诱导蛋白。

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第1章 绪 论

1.1 课题来源及研究的背景和意义

1.2 红松国内外研究现状

1.3 查尔酮合成酶的研究现状

1.4 本课题主要研究内容

1.5 本课题主要创新点

第2章 材料与方法

2.1 实验材料与试剂

2.2 实验仪器及设备

2.3 红松合子胚组织培养

2.4 红松多酚含量的测定

2.5 红松CHS基因实时荧光定量PCR

2.6 红松总蛋白双向电泳

第3章 外源因素对松多酚含量的影响

3.1 红松合子胚组织培养

3.2 没食子酸标准曲线

3.3 紫外光照对多酚含量的影响

3.4 培养温度对多酚含量的影响

3.4 季节对多酚含量的影响

3.5 本章小结

第4章 外源因素对红松CHS 基因表达的影响

4.1 紫外光照对CHS 基因表达的影响

4.2 温度对CHS 基因表达的影响

4.3 季节对CHS基因表达的影响

4.4 红松多酚含量与CHS基因表达量的关系

4.5 本章小结

第5章 红松蛋白质组分析

5.1 牛清血蛋白标准曲线的制作

5.2 紫外光照对红松不定芽蛋白质组的影响

5.3 培养温度对红松不定芽蛋白质组的影响

5.4 季节对红松松针蛋白质组的影响

5.5 本章小结

结论

参考文献

附录

读硕士学位期间发表的论文及其它成果

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