复方甲亢片对甲亢大鼠合并心脏病变的影响及其作用机理研究

摘要

目的通过采用灌胃法诱导建立甲亢大鼠合并心脏病变的模型，运用生化、电镜、高效液相色谱法、逆转录多聚酶链法(RT-PCR)，检测高甲状腺素水平下，大鼠心肌结构、超微结构、生理功能、激素水平、细胞因子、病理基因，确定造模的可靠性。使用复方甲亢片、纯中药、甲巯咪唑等进行干预，比较三种药物的疗效，从而得出结论。探索复方甲亢片治疗甲亢大鼠合并心脏病变的机理，以期为中西药结合治疗甲亢性心脏病提供理论依据。 方法清洁级SD大鼠60只，体重约250+15g，雌雄各半。随机分为五组，正常组、模型组、纯中药组、复方甲亢片组、甲巯咪唑组。每组十二只。正常组每天上午给以2ml蒸馏水喂服，其余四组均造模。造模方法，左旋甲状腺素钠片混悬液上午喂服，每日1mg/kg，每天一次。连续十七天。自造模第十七天始，正常组仍继续每天上午给以2ml蒸馏水喂服，其余四组均继续造模，继续左旋甲状腺素钠片混悬液上午喂服，每日1mg/kg，每天一次。此外下午加喂正常组与模型组大鼠每日灌2ml蒸馏水，复方甲亢片组每日下午加灌复方甲亢片混悬液2ml(相当于生药8g/kg)，纯中药组每日下午加灌服纯中药液2ml(相当于生药8g/kg)。甲巯咪唑组每日下午加灌服甲巯咪唑液2ml(相当于12mg/kg)。共连续五十天实验结束。实验结束后，每大鼠以20％乌拉坦麻醉(剂量0.5ml/100g体重)，腹腔注射麻醉。以生理二道仪记录心电图，眼眶取血，心脏称重，检测血浆BNP、血清TT3、TT4，心肌匀浆测羟普氨酸和Na+-K+-ATP酶。心肌HE染色进行病理切片检测，超薄切片进行透射电镜检测。免疫组化检测MMP2、bFGF、TNF-α因子。逆转录-多聚酶链反应法(RT-PCR)检测肌球蛋白重链的表型(α-MHC和β-MHC)。 结果1、复方甲亢片能比较明显改善甲亢大鼠合并的心脏疾病症状，提高生存率。 2、经检测大鼠血清TT3、TT4水平，检测大鼠心率及心律，显示模型组大鼠血清TT3、TT4水平、心率和心律失常发生率显著升高。心脏指数为最大。正常组大鼠血清TT3、TT4水平、心率和心律失常发生率最低，心脏指数为最低。经药物治疗后所有用药组血清TT3、TT4水平都有不同程度降低，心率、心律失常发生率、心脏指数也有不同程度下降。以复方甲亢片组血清TT3、TT4水平、心率、心律失常发生率、心脏指数降低为最明显。从统计结果看，正常组与模型组相比P＜0.01，有极显著差异。经治疗后，纯中药组和甲巯咪唑组与模型组相比P＜0.05，均有显著差异，说明两种药物均有效。复方甲亢片组与模型组相比P＜0.01，有极显著差异，与甲巯咪唑和纯中药相比P＜0.05，均有显著差异。说明复方甲亢片有效，并且效果优于纯中药和甲巯咪唑。 3、光镜下检测，HE染色显示正常组心肌细胞排列整齐，横纹清楚，间质较少，几乎看不到成纤维细胞。与正常组相比可见到模型组心肌细胞肥大，心肌细胞排列紊乱，肌丝排列异常，心肌纤维走向紊乱，横断面肌丝大小不一。间质增宽，可看到较多的成纤维细胞，心肌细胞间纤维组织增多，还可看到少量心肌细胞凋亡。部分心肌细胞肥大、胞质空泡变性，肌丝呈颗粒或丝网状。模型组为最重，复方甲亢片组为最轻。心肌的超微结构显示：正常组在电镜下可见肌原纤维纵向走向，肌节结构明显，Z带清楚，其间可见线粒体和肌质网，线粒体多呈单排分布，嵴结构清楚，肌质网相互吻合形成纵管系统。模型组肌质纤维溶解，肌质网扩张成空泡，大多数线粒体水肿，嵴断裂溶解和消失，为重度改变。纯中药组和甲巯咪唑组肌质网轻度扩张，线粒体水肿较轻，为轻度损害。复方甲亢片组肌质网轻度扩张，线粒体大致正常。 4、根据以上三点可以确定采用左旋甲状腺素钠灌胃法造模达到了预期目的。与所查到的文献记载相一致。 5、经检测大鼠心肌匀浆Na+-K+-ATP酶水平，显示模型组大鼠心肌Na+-K+-ATP酶水平显著降低。正常组大鼠心肌Na+-K+-ATP酶水平最高，经药物治疗后所有用药组心肌Na+-K+-ATP酶水平都有不同程度升高，以复方甲亢片组心肌Na+-K+-ATP酶水平升高为最明显。正常组与模型组相比P＜0.01，有极显著差异。经治疗后，纯中药组和甲巯咪唑组与模型组相比P＜0.05，均有显著差异，说明两种药物均有效。复方甲亢片组与模型组相比P＜0.01，有极显著差异，与甲巯咪唑和纯中药相比P＜0.05，均有显著差异。说明复方甲亢片有效，并且效果优于纯中药和甲巯咪唑。 6、正常组MMP2、bFGF和TNF-α因子免疫阳性物呈浅黄色，表达范围很小；模型组MMP2、bFGF和TNF-α免疫阳性物呈棕黄色，浓度高，表达范围广；所测OD值相比有极显著差异(P＜0.01)，说明模型组TNF-α、bFGF和MMP2过渡分泌。其余用药治疗组按颜色逐渐变浅，范围逐渐变小排列顺序为纯中药组、甲巯咪唑组、复方甲亢片组。其中复方甲亢片组颜色下降最显著，范围缩小最多。所测OD值与模型组相比也有极显著差异(P＜0.01)，其余各治疗组治疗后颜色有不同程度下降，范围都有缩小，所测OD值与模型组比(0.01＜P＜0.05)，说明上述药物都能抑制MMP2、bFGF和TNF-α因子过度分泌，以复方甲亢片组为效果最好。 7、心肌羟普氨酸含量，正常组最多，而模型组最少，相比有极显著差异(P＜0.01)，说明心脏相对于正常组来说，模型组有正常胶原的减少。复方甲亢片组与模型组相比也有极显著差异，说明复方甲亢片增加了心肌胶原的含量，另外甲巯咪唑组与模型组相比也有极显著差异(P＜0.01)。纯中药组与模型组相比有显著差异(0.01＜P＜0.05)，说明甲巯咪唑和纯中药在防止心脏重构方面有效，甲巯咪唑一定程度上优于纯中药，但是两者与复方甲亢片相比有显著差异，说明复方甲亢片的疗效优于纯中药或者纯西药。 8、心肌肌球蛋白重链的表型，通过RT-PCR检测，经计算各组α-MHCmRNA的RT-PCR产物的相对灰度值，心脏α-MHCmRNA的相对灰度值正常组最大，而模型组最小，相比有极显著差异(P＜0.01)，说明心脏相对于正常组来说，模型组α-MHC明显减少。复方甲亢片组与模型组相比也有极显著差异(P＜0.01)，说明复方甲亢片提高了α-MHC含量，另外甲巯咪唑组和纯中药组与模型组相比均有显著差异(0.01＜P＜0.05)，说明甲巯咪唑和纯中药在提高心脏α-MHC含量方面有效，而且与复方甲亢片相比有显著差异，说明复方甲亢片的疗效优于纯中药或者纯西药。经计算各组β-MHCmRNA的RT-PCR产物的相灰度值，心脏β-MHCmRNA的相对灰度值模型组最大，而正常组最小，相比有极显著差异(P＜0.01)，说明心脏相对于正常组来说，模型组β-MHC明显升高。复方甲亢片组与模型组相比也有极显著差异(P＜0.01)，说明复方甲亢片是降低了β-MHC含量，另外甲巯咪唑组与模型组相比有显著差异(0.01＜P＜0.05)，说明甲巯咪唑在降低心脏β-MHC含量方面是有效，而且与复方甲亢片相比有显著差异。纯中药组与模型组相比数值虽有减少，但P＞0.05，无显著差异。说明复方甲亢片在降低心肌β-MHC含量的疗效方面优于纯中药或者纯西药。 结论高甲状腺素除影响大鼠心脏血流动力学改变，还直接损害心肌，造成心脏重构，引起心律失常，并可刺激心肌细胞分泌生物因子引起心衰。甲状腺素对心脏的作用因剂量而异，高剂量甲状腺素会刺激心脏肌球蛋白重链基因向胚胎型转化。复方甲亢片能抑制高甲状腺素引起的心脏结构和功能的损害，改善高甲状腺素引起的心脏重构、心衰和心律失常，效果优于纯中药或者纯西药。

目录

英文缩略词表（按字母顺序排列）

前言

实验一复方甲亢片对甲亢大鼠合并心律失常的影响

实验二复方甲亢片对甲亢大鼠心脏的重构和心肌胶原蛋白含量的影响

实验三复方甲亢片对导致甲亢大鼠心脏重构的生物因子的影响

实验四复方甲亢片对甲亢性心力衰竭大鼠肿瘤坏死因子及血浆BNP水平的影响的影响

实验五复方甲亢片对甲亢大鼠心肌肌球蛋白重链表型的影响

讨论与结语

文献综述1甲亢性心脏病的研究进展

文献综述二 甲状腺素影响心脏扩大的病理研究进展

在校期间发表论文情况

致谢