人工虫草菌丝粉防治关木通肾损害大鼠肾间质纤维化的实验研究

摘要

目的：旨在探讨关木通水煎剂致大鼠肾间质纤维化的发病机理及人工虫草菌丝粉对其肾损害的防治作用。 方法： 将雄性Wistar大鼠(110g-150g)共30只，随机分为3组，即正常组(n=10)、木通组(n=10)、防治组(n=10)。采用关木通水煎剂不间断灌胃[10g/(kg·d)]制作大鼠慢性肾损害病理模型。防治组在造模同时灌胃人工虫草菌丝粉混悬液[5g/(kg·d)]。8周后，采用24小时尿蛋白定量、尿β<,2>-微球蛋白(β<,2>-MG)为观察指标，观察人工虫草菌丝粉对关木通慢性肾损害大鼠的防治作用；采用免疫组化技术检测金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)，基质金属蛋白酶9(MMP-9)在肾组织中的表达，以阳性表达积分为观察指标，观察MMP-9/TIMP-1的平衡失调对关木通水煎剂致大鼠肾间质纤维化的影响；以肾组织做病理切片，在光镜下观察肾脏组织结构的变化，以肾小管间质病理积分作为观察指标，观察人工虫草菌丝粉对关木通水煎剂致大鼠肾间质纤维化的影响。 结果： 造模八周后，木通组、防治组与正常组相比，大鼠体重明显降低(P<0.01)，24小时尿蛋白定量增加(P<0.05，P<0.01)，尿β<,2>-微球蛋白(β<,2>-MG)明显增加(P<0.01)。提示关木通水煎剂可导致肾小管功能损伤。防治组与木通组相比，体重降低，24小时尿蛋白定量及尿β<,2>-微球蛋白(β<,2>-MG)定量降低，但两者无统计学意义(P>0.05)。提示要从统计学上肯定人工虫草菌丝粉防治关木通水煎剂所引起的慢性肾损害的作用，还需更长时间的实验室观察。防治组及木通组肾小管间质病理积分显著高于正常组(P<0.01)；其中防治组积分虽低于木通组，但两者无统计学意义(P>0.05)，主要病理表现为大鼠肾间质纤维化。光镜检查两组肾组织出现不同程度的病理变化，肾间质呈灶状、多灶状或大片状纤维化，伴肾小管萎缩或消失，偶有肾间质少量散在或小灶状淋巴及单核细胞浸润，肾小球无明显病变。两组TIMP-1，MMP-9表达较正常组明显上调(P<0.01)。提示关木通水煎剂可刺激肾小管上皮细胞MMP-9的表达，这与其导致细胞外基质(ECM)合成增加有关，TIMP-1可能因反馈调节而表达增强，最终引起MMP-9/TIMP-1失衡，抑制胶原降解，导致细胞外基质积聚，加重肾间质纤维化。这种机制可能参与了关木通肾损害的形成。其中木通组TIMP-1表达较防治组上调(P<0.05)，MMP-9表达较防治组下调(P<0.01)，提示人工虫草菌丝粉可抑制TIMP-1表达，减少ECM沉积，从而减轻肾组织病理损伤。 结论： 本研究表明：关木通的肾毒性作用主要是导致肾间质纤维化。其机制可能是MMP-9/TIMP-1失衡，导致ECM积聚，促进了肾间质纤维化，引起肾损害。人工虫草菌丝粉可降低24小时尿蛋白定量和尿β<,2>-MG，但两者与木通组比较无统计学意义。提示要从统计学上肯定人工虫草菌丝粉防治关木通水煎剂所引起的慢性肾损害的作用，还需更长时间的实验室观察。人工虫草菌丝粉可降低TIMP-1的表达，上调MMP-9的表达，能减轻关木通肾间质纤维化的程度，对进一步探索关木通导致的肾间质纤维化的防治途径具有重要意义。

目录

论文说明：缩略词中英文对照表

声明

前言

材料和方法

1.实验材料

2.实验方法

3.统计学方法

结果

1.一般情况

2.大鼠体重

3.24小时尿蛋白定量

4.尿β2-MG

5.病理观察

6.肾小管间质病理积分

7.肾组织TIMP-1，MMP-9阳性表达比值(表达情况见附图)

讨论

1.关木通肾损害大鼠模型评价

2.关木通肾损害发病机理

3.中医病机

4.人工虫草菌丝粉的现代药理研究和治疗作用

5.指标选择依据及实验结果分析

结语

参考文献

文献综述 马兜铃酸肾病研究新进展

附图

致谢