再生障碍性贫血患者外周血CD4+CD25+Tregs细胞、T-bet mRNA和IL-21表达研究

摘要

目的：检测再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA，再障）患者外周血单个核细胞（peripheral blood monouclear cells， PBMCs）中 CD4+CD25+Treg细胞（CD4+CD25+regulatory T cell，CD4+CD25+调节性T细胞）比例、Foxp3和T-bet mRNA表达水平、血浆白介素-21（interleukin-21，IL-21）和干扰素-γ（interferon-γ， IFN-γ）的水平，初步探讨CD4+CD25+Treg细胞、Foxp3 mRNA、T-bet mRNA、IL-21和IFN-γ的表达与AA免疫病理学和AA患者预后的关系。
　　方法：流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测30例初发AA患者、11例治疗后处于恢复期的AA患者和10例治疗后未处于恢复期的AA患者的PBMCs中CD4+CD25+Treg细胞比例；半定量RT-PCR检测21例初发AA患者、5例治疗后处于恢复期的AA患者和6例治疗后未处于恢复期的AA患者的PBMCs中Foxp3和T-bet mRNA表达水平；ELISA法检测24例初发AA患者血浆IL-21、IFN-γ水平。对照组为20例健康体检者和健康志愿者，相同的方法检测以上项目。
　　结果：①CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞、CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞的比例：在30例初发AA患者中分别为（13.31±3.97）％、（1.09±0.41）%、（0.98±0.39）%，在11例治疗后处于恢复期的AA患者中分别为（12.86±3.61）%、（1.31±0.42）%、（1.27±0.31）%，在10例治疗后未处于恢复期的AA患者中分别为（11.70±5.12）%、（1.19±0.51）%、（1.12±0.37）%，在20例的正常对照中分别为（11.98±2.71）%、（1.47±0.32）%、（1.23±0.26）%。四组样本间CD4+CD25+T细胞比例无明显差异（P均＞0.05），初发 AA患者的CD4+CD25highT细胞和CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例明显低于正常对照组（P＜0.05），与治疗后处于和未处于恢复期的AA患者比较，无明显差异（P＞0.05），治疗后处于和未处于恢复期的AA患者间CD4+CD25highT细胞和CD4+CD25+Foxp3+T细胞比较也无明显差异（P＞0.05）。②Foxp3 mRNA在21例初发AA患者、5例治疗后处于恢复期的AA患者、6例治疗后未处于恢复期的AA患者和正常对照组的表达分别为（0.22±0.10）、（0.39±0.21）、（0.31±0.15）和（0.36±0.12），初发AA患者的Foxp3 mRNA表达明显比正常对照组低（P＜0.01），与治疗后处于和未处于恢复期的AA患者比较，无明显差异（P＞0.05），治疗后处于和未处于恢复期AA患者的Foxp3 mRNA表达也无明显差异（P＞0.05）。T-bet mRNA在21例初发AA患者、5例治疗后处于恢复期的AA患者、6治疗后未处于恢复期的AA患者和正常对照组的表达分别为（0.42±0.11）、（0.27±0.13）、（0.44±0.10）和（0.32±0.08），初发AA患者的T-bet mRNA表达明显高于正常对照组（P＜0.01），治疗后未处于恢复期的AA患者T-bet mRNA表达明显高于正常对照组（P＜0.05），与初发AA患者比较无明显差异（P＞0.05），治疗后处于恢复期的AA患者T-bet mRNA表达低于初发AA患者（P＜0.05），而与正常对照组比较无明显差异（P＞0.05）。③24例初发AA患者血浆IFN-γ和IL-21的浓度分别为（50.95±17.52）pg/ml和（69.43±27.45） pg/ml，20例的正常对照血浆 IFN-γ和 IL-21的浓度分别为（39.18±10.10）pg/ml和（53.96±19.70）pg/ml。初发AA患者血浆IFN-γ和IL-21的水平明显高于正常对照组（P＜0.05）。
　　结论：①CD4+CD25+Foxp3+T细胞数量和 Foxp3 mRNA表达下降是 AA患者免疫耐受打破的原因之一。②AA患者T-bet mRNA和IFN-γ表达升高，提示T-bet和IFN-γ表达异常在AA的免疫病理学中发挥一定的作用。③对AA患者而言，IL-21可能作为一种造血负性调节因子而起作用。

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中文摘要

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前言

材料和仪器

1.研究对象

2.实验材料

3. 实验仪器

实验方法

1. 外周血单个核细胞（PBMCs）分离

2. FCM检测PBMCs中CD4+CD25+Treg细胞

3 半定量RT-PCR检测T-bet mRNA和Foxp3 mRNA的表达

4 血浆IFN-γ测定（ABC-ELISA法）

5 血浆IL-21测定（ABC-ELISA法）

6 血常规和网织红细胞绝对值检测

7 统计学处理

结果

1 AA患者PBMCs中CD4+CD25+Treg比例

2 AA患者PBMCs中Foxp3 mRNA和T-bet mRNA表达

3 初发AA患者血浆IFN-γ、IL-21检测结果

4 检测结果的相关性分析

讨论

结论

参考文献

致谢

附录

A、英文词汇对照

B、常用试剂配制

C、个人简介及发表的文章

D、综述1: 再生障碍性贫血与异常的免疫应答

综述2: 再生障碍性贫血发病机制研究现况