农杆菌介导的几丁质酶基因、β-1，3葡聚糖酶基因转化辣椒的研究

摘要

本研究的目的是利用基因工程手段，通过农杆菌介导法将抗真菌病几丁质酶基因、β，1-3葡聚糖酶基因导入辣椒，获得抗真菌病的转基因植株，提高辣椒的产量和品质，为辣椒的抗病分子育种提供基础材料和理论依据，为解决辣椒抗真菌病问题探索新途径。主要研究结果如下：1建立了辣椒高效再生体系(1)确定了诱导芽分化的培养基为：MS+6-BA5mg/L+IAA0.2mg/L，30g/L蔗糖，0.8％琼脂，pH5.8。(2)确定了诱导芽伸长的培养基为：MS+6-BA3mg/L+GA32mg/L，30g/L蔗糖，0.8％琼脂，pH5.8。(3)确定了生根培养基为：MS+NAA0.1mg/L，30g/L蔗糖，0.8％琼脂，pH5.8。(4)不同的外植体分化率不同同一基因型的子叶、子叶节和下胚轴三种外植体，子叶节和子叶的分化率最高，下胚轴次之。1号品种子叶节、子叶和下胚轴的分化率依次是100％、100％和56.7％；2号品种子叶节、子叶和下胚轴的分化率依次是100％、100％和55％；3号品种子叶节、子叶和下胚轴的分化率依次是90.9％、88.3％和53.3％。(5)基因型不同，分化率不同。供试品种1号、2号和3号的子叶分化率分别为100％、100％、88.3％，下胚轴分化率分别是56.7、55％和53.3％。2建立了农杆菌介导的辣椒遗传转化体系(1)确定了Km在不同阶段的筛选浓度芽分化阶段，Km的筛选压力确定为：1号、2号的子叶为50mg/L，3号子叶为40mg/L;不定芽生根阶段Km的筛选压力确定为15mg/L。(2)确定了除菌抗生素的使用种类及其抑菌浓度为了既能很好的抑制农杆菌的生长，又能尽可能的减少对外植体的伤害，建议使刚国产头孢来除菌，使用浓度为350mg/L。(3)确定了预培养的最佳时间为36h。(4)确定了最佳侵染时间为10min。(5)确定了共培养时间为48h。

目录

文摘

英文文摘

1前言

1.1研究目的和意义

1.2文献综述

1辣椒疫病育种研究进展

2、植物抗真菌基因工程的研究策略

3、辣椒基因工程进展

2材料与方法

2.1辣椒再生体系建立

2.1.1实验材料

2.1.2实验方法

2.2辣椒遗传转化体系建立

2.2.1实验材料

2.2.2实验方法

2.2.3辣椒遗传转化效率的主要影响因素的探讨

2.3转基因植株PCR检测

2.3.1实验材料

2.3.2实验方法

3结果与分析

3.1辣椒再生体系的建立

3.1.1芽分化培养基的筛选

3.1.2芽伸长培养基的筛选

3.1.3生根培养基的确定及再生植株驯化移栽

3.1.4影响辣椒再生的因素探讨

3.2农杆菌介导的辣椒遗传转化

3.2.1双价植物表达载体pBch转化农杆菌

3.2.2辣椒对Km的敏感性试验

3.2.3抗生素对辣椒愈伤组织的诱导和分化的影响

3.2.4影响辣椒遗传转化因素的探讨

3.3转基因辣椒的PCR检测

4讨论

4.1再生体系的建立的影响因素

4.1.1基因型

4.1.2外植体类型

4.1.3激素组合

4.2抗生素浓度对芽再生的影响

4.3脱菌剂的选择和浓度的确定

4.4影响辣椒遗传转化的因素

4.4.1预培养

4.4.2侵染时间

4.4.3共培养时间

4.5基因工程防治真菌病害的策略及存在的问题

5结论

5.1建立了辣椒高频再生体系

5.2建立了农杆菌介导的辣椒遗传转化体系

5.3获得了PCR检测为阳性的植株

参考文献

缩写表

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