发根农杆菌介导几丁质酶基因和β-1、3-葡聚糖酶基因转化烟草的研究

摘要

用冻融法和三亲交配法将具有几丁质酶基因、β-1,3-葡聚糖酶基因和卡那霉素抗性标记基因的质粒pBLGC导入具有Ri质粒的发根农杆菌中。用叶盘法转化烟草的三个品种,经Kan抗性筛选获得126株再生植株,对119株再生植株分别以启动子CaMV35S、几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因的引物进行PCR检测,其中几丁质酶基因呈阳性的植株有72株,β-1,3-葡聚糖酶基因呈阳性的有47株,具有几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因的植株有36株。对转化的24株转基因经PCR-Southern杂交,结果均呈阳性。实验结果表明,外源基因的转化频率与植物品种、外源基因片段的大小有关,几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因分别或共同整合到植物基因组中。