小鼠早期胚胎发育过程中细胞凋亡及凋亡基因表达的检测

摘要

早期胚胎发育过程当中伴随着大量的发育异常的细胞，尤其在体外培养过程中更为普遍。细胞凋亡是体细胞中清除发育异常细胞的重要途径之一，研究表明，早期胚胎当中异常细胞的清除也是通过细胞凋亡的途径实现的。着床前胚胎当中凋亡现象普遍存在，即使是形态正常的胚胎当中也存在凋亡细胞，而细胞凋亡的发生是凋亡基因的表达的直接结果。胚胎细胞大比率的凋亡对胚胎的生长是不利的，为了提高体外培养胚胎的存活能力，人们通过改变培养条件，添加生长因子来抑制胚胎细胞的凋亡。 各种生长因子影响胚胎发育能力的研究已有大量的报道，但这些研究大多停留于各时期胚胎发育率的数据统计，而对各种生长因子对胚胎作用的分子机制没有做进一步的深入研究。尤其对早期胚胎发育过程当中生长因子与凋亡基因表达变化之间的关系研究的更少。对早期胚胎发育过程中凋亡基因表达变化的研究对于揭示早期胚胎发育机制有重要的意义。 本实验采用彗星电泳、改进后的胚胎RNA提取方案结合巢式RT-PCR、免疫化学染色的方法，对小鼠体内早期胚胎在发育过程中的细胞凋亡情况及凋亡基因Bcl-2家族的表达情况进行了研究。同时检测了IGF-1在体外培养条件下对小鼠胚胎细胞凋亡及凋亡基因Bcl-2家族(Bax、Bcl-2、Bak、Bcl-xl)表达的影响，初步揭示了IGF-1可能通过调节Bcl-2家族基因的表达，抑制细胞凋亡的发生，提高了小鼠胚胎的质量和胚胎的发育率。这对于揭示早期胚胎发育机制机理以及获得更多的优质胚胎有重要的意义。 实验结果表明： 1.在国内同类研究中率先使用彗星电泳的方法检测早期胚胎当中的凋亡现象。彗星电泳结果表明早期胚胎发育过程中广泛存在凋亡，不同发育时期的形态正常的胚胎当中存在凋亡细胞。 2.采用改进的胚胎细胞总RNA提取方案，应用少量胚胎提取总RNA，使用巢式PCR的方法检测到Bcl-2家族当中4个基因(Bax、Bcl-2、Bak、Bcl-xl)在小鼠胚胎发育的早期表达，且表达情况随发育时期的不同而变化。 3.体外无血清培养条件下，凋亡胚胎比率上升，并且Bax基因在桑椹胚期表达量上升，而Bcl-2基因的表达量降低。 4.100ng/mlIGF-1能够促进小鼠胚胎的生长，提高各时期胚胎发育比率及囊胚发育率，降低凋亡胚胎比率。 5.在同类研究中首次直接证明，IGF-1对小鼠早期胚胎发育过程中Bcl-2家族Bcl-2及Bcl-xl基因的表达有明显的影响。100ng/mlIGF-1能够上调桑椹胚期Bcl-2基因的表达以及桑椹胚期和囊胚期Bcl-xl的表达量;对促凋亡基因Bax及Bak在小鼠早期胚胎当中的表达没有明显的影响。

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摘要

1.引言：

2.材料和方法

3.结果

4.讨论

5.结论

6.致谢

7.参考文献

8.图版及说明

9.攻读硕士期间发表的学术论文