反刍月形单胞菌及其转座工程菌对羊瘤胃发酵的影响

摘要

本研究取健康奶牛瘤胃液，按照厌氧菌分离步骤和鉴别程序，通过丙酸生成菌株的特异性培养基CDC血琼脂平板及普通LB琼脂平板，共筛选出10株瘤胃丙酸生成厌氧菌，选取其中1株K6分析其生物化学反应特性。根据GenBank中反刍月形单胞菌(M62730)的序列设计引物，从其基因组DNA中克隆出16SrRNA基因，经过序列测定，将所得序列经BLAST与GenBank数据库中已报道的序列进行同源性分析，结果显示所获得序列与已报道的反刍月形单胞菌序列的同源性达到98％，结合形态学和生化反应的检测结果，证实K6为月形单胞菌属反刍月形单胞菌。 取12只健康小尾寒羊进行瘤胃瘘管手术后平均分成两组，每组6只。将反刍月形单胞菌原始菌(K6)与本实验室构建的转座基因工程菌(TnK6)通过瘤胃瘘管注入瘤胃内，测定0h～144h内瘤胃液的pH值、乳酸和挥发性脂肪酸(VFA)的浓度。结果表明：在0h～144h内，两组间乳酸浓度、丙酸浓度和丁酸浓度差异均不显著(p＞005)，TnK6组pH、乙酸与丙酸浓度的比值(C2/C3)显著低于K6组(p＜0.05)，TnK6组的乙酸浓度极显著低于K6组(p＜0.01)。表明这两种菌均能利用乳酸生成乙酸、丙酸、丁酸，降低C2/C3，但TnK6能极显著降低乙酸产量，从而显著降低C2/C3，相对增加丙酸在总VFA中的比例。 研究K6及TnK6对乳酸、VFA代谢以及C2/C3的影响，可为反刍月形单胞菌微生态制剂的开发奠定基础，为防治围产期奶牛能量代谢障碍性疾病开辟新径。

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1引言

2材料与方法

3结果

4讨论

5结论

致谢

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