黑龙江猪旋毛虫43ku ES抗原基因的克隆与表达

摘要

本文对黑龙江猪旋毛虫43ku ES抗原基因的克隆与表达进行了探讨。本研究根据GenBank中编码旋毛虫Ts43基因的eDNA序列(M95499)，设计并合成引物，利用RT-PCR方法获得黑龙江猪旋毛虫Ts43基因后，成功克隆TS43基因，与参考序列的同源性为99.61％，氨基酸序列同源性为99.13％；在此基础上成功地构建了旋毛虫肌幼虫ES抗原基因TS43基因片段的原核表达载体pET32a-Ts43和真核表达载体pcDNA3.1/CT-GFP-Ts43。

目录

文摘

英文文摘

声明

1引言

1.1我国旋毛虫病的流行分布情况

1.2旋毛虫肌幼虫ES抗原的研究进展

1.2.1抗原的分类

1.2.2旋毛虫肌幼虫ES抗原在诊断应用

1.2.3旋毛虫肌幼虫ES抗原在保护方面的研究

1.3Ts43ku ES抗原的研究进展

1.4研究的目的与意义

2.材料与方法

2.1材料

2.1.1虫种

2.1.2实验动物

2.1.3引物

2.1.4克隆与表达所用材料

2.1.5旋毛虫ES抗原、阳性与阴性血清

2.1.6 ELISA所需溶液

2.1.7主要试剂

2.1.8主要仪器

2.2方法

2.2.1旋毛虫肌幼虫的收集

2.2.2旋毛虫阳性血清及阴性血清的制备

2.2.3目的基因的分子克隆和鉴定

2.2.4 Ts43ku ES抗原基因原核表达与鉴定

2.2.5Ts43ku ES抗原基因的真核表达与鉴定

3结果

3.1虫体收集

3.2总RNA检测

3.3目的基因的RT-PCR扩增

3.4目的基因的分子克隆和鉴定

3.5目的基因的原核表达

3.5.1重组质粒pET32a-Ts43的鉴定

3.5.2诱导表达蛋白的分析

3.5.3复性前后的蛋白间接ELISA分析

3.6目的基因的真核表达

3.6.1重组质粒pcDNA3.1-CT-GFP-Ts43的鉴定

3.6.2 pcDNA3.1-CT-GFP-Ts43在Vero E6细胞中的瞬时表达

3.6.3 Western-blotting检测目的基因

4讨论

4.1 Ts43基因的克隆与重组质粒的构建

4.2相关表达载体的选择

4.2.1原核表达载体的选择

4.2.2真核表达载体的选择

4.3 Ts43目的基因的表达

5.结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文