小鼠卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育过程中RCC1的表达及定位

摘要

RCC1(Regulatorofchromosomecondensation)是目前唯一已知的Ran鸟嘌呤核苷酸交换因子。RCC1作为细胞周期调节因子在许多有机体的细胞中发挥作用。RCC1调节RanGDP到RanGTP的转换，在核内输、外运，有丝分裂期纺锤体的形成及核膜的重组，防止S期DNA多重复制等过程中发挥作用。 在本实验中，首先用巢式PCR.检测RCC1在小鼠GV期卵母细胞和早期胚胎中的表达情况。发现GV期卵母细胞到受精后的二细胞、四细胞、八细胞期，桑葚胚及囊胚的胚胎细胞中，RCC1mRNA的表达量逐渐升高。 之后用激光共聚焦显微技术分别检测了小鼠卵母细胞减数分裂成熟、受精和早期胚胎有丝分裂过程中RCC1的定位，发现RCC1主要位于卵母细胞、合子和早期胚胎细胞的间期细胞核内，核仁中没有RCC1分布，细胞质中微量分布；卵母细胞核膜破裂后，RCC1分布到整个细胞，在细胞质中分布均匀，未见RCC1在染色体周围浓集；减数分裂的后期和末期染色体分离后，RCC1在细胞质中分布亦比较均匀，未见RCC1在染色体周围浓集。卵母细胞受精后，未观察到RCC1在母源染色体和解聚的精子染色体位置浓集，而是在细胞中均匀分布。原核形成后RCC1逐渐转移到核内，细胞质内的浓度逐渐降低。 在小鼠睾丸支持细胞中，RCC1主要分布于有丝分裂间期细胞的细胞核中，核仁内没有分布，细胞质中浓度较低。 RCC1的这种表达和分布情况，可以在细胞周期转换，核内输、外运，有丝分裂期纺锤体的组装及核膜的重组等过程中发挥作用，间期时与其它有机体的体内和体外实验中获得的结果是一致的，细胞分裂期未见RCC1在染色体周围的特异性分布。

目录

文摘

英文文摘

声明

1. 引言

1.1RCC1的发现和命名

1.2RCC1的作用

1.2.1RCC1在核物质内输外运中的作用

1.2.2RCC1与染色体偶联产生RanGTP的机制

1.2.3RCC1在核膜重组中的作用

1.2.4RCC1在DNA复制中的作用

1.2.5RCC1在纺锤体组装中的作用

1.2.6RCC1核内输的调节机制

1.3哺乳动物卵子发生与受精过程

1.4本试验研究的目的及意义

2. 材料与方法

2.1主要器材和试剂

2.1.1主要器材

2.1.2实验试剂

2.1.3实验动物

2.2实验过程

2.2.1小鼠卵母细胞的收集与培养

2.2.2小鼠胚胎细胞的获取

2.2.3小鼠睾丸支持细胞的培养

2.2.4组织细胞的制片

2.2.5共聚焦显微术

2.2.6胚胎总RNA的提取步骤

2.2.7巢式PCR

3 实验结果

3.1巢式RT-PCR检测RCC1基因表达情况

3.2RCC1在小鼠卵母细胞减数分裂成熟、受精和早期胚胎有丝分裂过程中的定位

3.2.1RCC1在小鼠卵母细胞成熟过程中的定位

3.2.2RCC1在小鼠卵母细胞受精、原核形成和原核破裂过程中的定位

3.2.3RCC1在小鼠早期胚胎有丝分裂过程中的定位

3.2.4RCC1在小鼠睾丸支持细胞中的定位

4 讨论

4.1试验结果的可靠性

4.2RCC1mRNA在卵母细胞和早期胚胎细胞中的表达

4.3RCC1在细胞间期的定位

4.4RCC1在卵母细胞减数分裂、早期胚胎中的定位

4.5RCC1在核膜破裂、重组和细胞核形成过程中的定位

4.6RCC1在细胞周期控制中的作用

5 结论

致谢

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文