两株益生菌对鸡胚肠细胞NO、IFN-γ产生的影响

摘要

本研究以鸡胚肠细胞为模型，以两株益生菌（嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌）和新城疫病毒（NDV）（Ⅳ系）为研究对象，通过检测细胞培养液上清中干扰素-γ（IFN-γ）和一氧化氮（NO）的水平，以探讨在鸡胚肠细胞模型上NDV（Ⅳ）与嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌的相互作用。
　　 用组织块法建立鸡胚肠细胞模型，在模型的基础上，通过加入益生菌种类及活性不同，分为干酪乳杆菌组、干酪乳杆菌培养液上清组、干酪乳杆菌破碎菌体组和嗜酸乳杆菌组、嗜酸乳杆菌培养液上清组；加入病毒滴度不同，分为NDV1（100TCID50）组及NDV2（1000TCID50）组：益生菌和病毒的先后顺序不同，分为先益生菌后病毒组，先病毒后益生菌组，同时加入益生菌和病毒组；及细胞，益生菌和病毒的对照组。
　　 通过ELISA方法用试剂盒检测样品中干扰素-γ的含量，运用经典的Gfiess Reagant方法，检测样品中一氧化氮的含量。利用统计学分析益生菌在鸡胚肠细胞模型上对新城疫病毒的抑制作用及对鸡胚肠细胞的免疫作用影响。
　　 通过以上实验得到了以下结论：
　　 1建立了鸡胚肠细胞模型，并应用于所试干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌对鸡胚肠细胞NO、干扰索-γ产生影响的实验。
　　 2 NDV感染诱导肠细胞分泌致炎性细胞因子NO及IFN-γ，酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌的活菌能够显著抑制IFN-γ的分泌，NO的变化不显著。而菌体培养液上清及破碎菌体促进了IFN-γ的水平在两种不同滴度的NDV干预后，NO及IFN-γ的分泌量没有显著变化。在不同时间段检测NO及IFN-γ的水平，在1～24h的时间范围内呈正相关。

目录

文摘

英文文摘

Contents

1 前言

1.1 益生菌及其研究进展

1.1.1 益生菌的概况

1.1.2 益生菌的分类

1.1.3 益生菌株的选择标准

1.1.4 益生菌与机体免疫作用研究

1.1.5 益生菌与肠粘膜免疫

1.2 一氧化氮的概况

1.2.1 一氧化氮的生物活性和生理作用

1.2.2 一氧化氮的免疫调节作用

1.3 干扰素及其研究进展

1.3.1 干扰素的发现与分类

1.3.2 干扰素的产生和分布

1.3.3 干扰素的主要生物学功能

1.3.4 干扰素抗病毒机理

2 材料与方法

2.1 材料与方法

2.1.1 菌种和培养基及主要试剂

2.1.2 实验动物

2.1.3 主要仪器和设备

2.2 方法

2.2.1 益生菌及其培养液上清、破碎菌体的准备

2.2.2 NDV的毒力测定

2.2.3 药敏试验及不同浓度抗生素对益生菌的抑制效果

2.2.4 鸡胚肠黏膜上皮细胞模型的建立

2.2.5 干酪乳杆菌及干酪乳杆菌培养液上清及破碎菌体与NDV作用于细胞模型

2.2.6 嗜酸乳杆菌及嗜酸乳杆菌培养液上清与NDV作用于细胞模型

2.3 检测方法

2.4 统计学处理

3 结果与分析

3.1 鸡胚肠细胞组织块法培养

3.2 NO及IFN-γ的检测

3.2.1 干酪乳杆菌与NDV作用于细胞模型

3.2.2 嗜酸乳杆菌与NDV作用于细胞模型

4 讨论

4.1 鸡胚肠黏膜上皮细胞模型的建立

4.2 不同菌态组合的NO及IFN-γ水平

4.3 NDV的不同浓度对NO及IFN-IFN-γ水平的影响

4.4 不同时间变化的NO及IFN-γ水平

4.5 加入顺序先后组合的NO及IFN-γ水平

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文