声明
摘要
1 前言
1．1 支原体概述
1．1．1 支原体的概念及特征
1．1．2 支原体的分类
1．1．3 支原体的分离鉴定
1．1．4 支原体病的诊断
1．1．5 支原体的致病机制
1．2 支原体及其粘附蛋白的研究进展
1．2．1 人肺炎支原体(M．pneumonia，Mp)
1．2．2 人生殖支原体(M．genitalium，Mg)
1．2．3 猪肺炎支原体(M．hyopneumoniae，Mhp)
1．2．4 牛支原体(M．bovis)
1．2．5 丝状支原体丝状亚种SC小菌落型(M．mycoides subsp．Mycoides SC，MmmSC)
1．2．6 山羊传染性胸膜肺炎相关支原体
1．3．leachii支原体概述
1．3．1 发现与研究历史
1．3．2 致病性
1．3．3 传播途径
1．3．4 诊断
1．3．5 防控
1．4 研究的目的及意义
1．4．1 leachii支原体粘附蛋白的筛选
1．4．2 leachii支原体单克隆抗体的制备
2 材料与方法
2．1 材料
2．1．1 菌株、载体、细胞及实验动物
2．1．2 主要试剂及试剂盒
2．1．3 主要仪器设备
2．1．4 主要试剂及配置方法
2．2 方法
2．2．1 leachii支原体的培养
2．2．2 leachii支原体基因组的提取
2．2．3 lppA基因及eno基因的PCR扩增
2．2．4 eno基因的定点诱变
2．2．5 重组蛋白的表达与纯化
2．2．6 重组蛋白多克隆抗体的制备
2．2．7 Western blot
2．2．8 LPPA蛋白及a-烯醇酶的膜定位
2．2．9 细胞粘附抑制试验
2．2．10 Columbas图像分析粘附抑制率
2．2．11 重组蛋白特异性粘附试验
2．2．12 leachii支原体全菌体免疫原的制备
2．2．13 动物的免疫接种
2．2．14 杂交瘤细胞株的建立
2．2．15 杂交瘤细胞的筛选
2．2．16 腹水的制备
3 结果
3．1 leachii支原体粘附蛋白的筛选与鉴定
3．1．1 lppA和eno基因的获得
3．1．2 pET28a-lppA及pET28a-eno重组质粒的构建
3．1．3 重组质粒pET28a-lppA和pET28a-eno的诱导表达
3．1．4 重组LPPA以蛋白和a-烯醇酶的纯化
3．1．5 LPPA及a-烯醇酶的膜定位
3．1．6 LPPA及a-烯醇酶的粘附特性
3．2 leachii支原体单克隆抗体的制备
3．2．1 leachii支原体单克隆抗体的反应性
3．2．2 leachii支原体单克隆抗体的效价
3．2．3 leachii支原体单克隆抗体的亚类鉴定
3．2．4 leachii支原体单克隆抗体的粘附抑制特性
4 结论
4．1 leachii支原体粘附蛋白的筛选
4．2 leachii支原体单克隆抗体的制备
4 讨论
4．1 LPPA蛋白与a-烯醇酶在leachii支原体粘附过程中的作用
4．2 粘附蛋白与leachii支原体毒力的相关性
4．3 粘附蛋白作为疫苗候选抗原的免疫保护性
4．4 用单克隆抗体鉴定leachii支原体的粘附蛋白
4．5 单克隆抗体在leachii支原体病诊断中的应用
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
