棉酚致小鼠睾丸生精细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达相关性研究

摘要

为了研究探讨棉酚对雄性小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。本试验选用48只4-5周龄20.21±1.56g健康的雄性昆明小鼠为研究对象。在室温条件下常规饲养1周，适应环境之后随机分为4组，每组12只，对照组（1％羧甲基纤维素钠0.4 mL），低剂量组(30 mg·kg-1·d-1)、中剂量组(60 mg·kg-1·d-1)、高剂量组(240 mg·kg-1·d-1)，灌服由1％羧甲基纤维素钠稀释的棉酚0.4 mL，连续灌胃给药20天。第21天处死，取睾丸组织保存，用于各项试验检测。通过光学显微镜观察睾丸组织病理学变化;透射电镜观察棉酚对睾丸生精细胞超微结构的影响;原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测睾丸组织生精细胞的凋亡情况;免疫组织化学法检测Bax和Bcl-2蛋白的分布和表达;RT-PCR法检测睾丸组织Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的表达。研究结果表明:苏木精-伊红(HE)染色观察到小鼠睾丸组织结构，对照组无明显的病理变化，低、中剂量组病变轻微;高剂量组正常结构遭到严重的破坏，结构松散，生精小管管壁变薄，各级生精细胞排列紊乱，生精细胞大量的成团脱落到管腔内，甚至没有成熟的精子。透射电镜观察到对照组各级生精细胞超微结构完整，细胞器结构清晰;低剂量组变化较小;中剂量组和高剂量组生精细胞超微结构损伤严重，可以观察到自噬体，成熟精子顶体膜断裂。TUNEL检测发现对照组小鼠睾丸组织中仅有零星散在的凋亡细胞;凋亡指数，与对照组相比，低剂量组升高但不显著(P＞0.05)，中剂量组与高剂量均都显著升高(0.01＜P＜0.05，P＜0.01)。Bax蛋白的表达结果，低剂量组较对照组有所升高(P＞0.05);中剂量组表达明显升高(0.01＜P＜0.05);高剂量组升高极显著(P＜0.01);与低剂量组相比，中剂量组与高剂量组Bax蛋白显著升高(0.01＜P＜0.05，P＜0.01)。低剂量组Bcl-2蛋白表达较对照组升高(P＞0.05)，中剂量组和高剂量组Bcl-2蛋白显著降低(0.01＜P＜0.05，P＜0.01)。与对照组相比，低剂量组Bcl-2mRNA表达量明显升高(0.01＜P＜0.05)，Bax mRNA表达量增加，但是无统计学意义;与对照组和低剂量组相比，中剂量组Bcl-2 mRNA表达量显著降低(0.01＜P＜0.05)，Bax mRNA表达量显著升高(0.01＜P＜0.05);高剂量组较对照组和低剂量组Bcl-2 mRNA表达量都极显著降低(P＜0.01)，Bax mRNA表达量都升高极显著(P＜0.01)。高剂量组Bcl-2 mRNA表达较中剂量组明显降低(0.01＜P＜0.05)，Bax mRNA表达量明显升高(0.01＜P＜0.05)。
　　综上所述棉酚能够破坏小鼠睾丸组织结构，引起生精细胞凋亡，而且这种凋亡与Bax表达升高，Bcl-2表达降低有关。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 棉酚的物理和化学性质

1．2 棉酚的药理作用

1．2．1 棉酚的抗肿瘤作用

1．2．2 棉酚的抗病毒作用

1．2．3 棉酚的抗炎作用

1．3 棉酚的毒性

1．3．1 棉酚的雄性生殖毒性

1．3．2 棉酚的雌性生殖毒性

1．4 细胞凋亡

1．4．1 细胞凋亡概述

1．4．2 细胞凋亡的通路

1．4．3 细胞凋亡相关蛋白

1．5 棉酚与细胞凋亡

1．5．1 棉酚与线粒体的作用

1．5．2 棉酚与酶的作用

1．6 生精细胞凋亡的基因调控

1．7 试验研究的目的与意义

2 材料与方法

2．1 试验动物

2．2 分组处理

2．3 主要仪器与试剂

2．3．1 主要仪器及设备

2．3．2 主要试剂

2．4 检测内容与方法

2．4．1 光镜下睾丸组织学的观察

2．4．2 睾丸组织超微结构的观察

2．4．3 检测睾丸生精细胞凋亡

2．4．4 检测睾丸组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达

2．4．5 检测睾丸组织Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达

2．5 实验数据的处理与分析

3 结果

3．1 光显微镜下睾丸组织学观察结果

3．2 睾丸组织超微结构的观察结果

3．3 小鼠睾丸组织中生精细胞凋亡情况

3．4 小鼠睾丸组织中Bcl-2，Bax蛋白表达情况

3．5 小鼠睾丸组织中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达情况

3．5．1 小鼠睾丸总RNA的提取结果

3．5．2 小鼠睾丸Bax、Bcl-2、β-actin mRNA的鉴定结果

3．5．3 小鼠睾丸Bax、Bcl-2 mRNA表达水平检测结果

4 讨论

4．1 棉酚对小鼠睾丸组织结构的影响

4．2 棉酚对小鼠生精细胞亚结构的影响

4．3 棉酚对生精细胞凋亡的影响

4．4 棉酚对小鼠生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

4．5 棉酚对小鼠生精细胞Bcl-2、Bax基因表达的影响

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文