REV感染对SPF雏鸡外周血液及免疫器官TGF-β1含量变化的影响

摘要

禽网状内皮组织增生病(Reticuloendotheliosis，RE)是一种严重危害养禽业的免疫抑制性肿瘤病，该病由禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosisvirus，REV)引起，导致禽体内网状内皮细胞增生，并伴有强烈的免疫抑制。转化生长因子β1(Transforming growthfactorβ1，TGF-β1)是一种具有多种生物学功能的细胞因子，在细胞增殖分化、组织损伤修复、骨再生、间质形成等方面起关键作用。本实验以1日龄SPF雏鸡为研究对象，自制兔抗鸡TGF-β1多克隆抗体，应用实时荧光定量PCR法及间接ELISA法，分别在基因和蛋白水平上对REV感染雏鸡外周血液及免疫器官TGF-β1的动态变化进行检测，结果如下:
　　(1)1日龄SPF雏鸡感染REV后，外周血液TGF-β1mRNA表达量在感染后7～42d极显著高于对照雏鸡(p＜0.01);外周血中TGF-β1含量在病毒感染后14～42d极显著高于对照雏鸡(p＜0.01)。表明REV感染可致雏鸡外周血液TGF-β1mRNA表达量急剧升高，在感染后期TGF-β1蛋白分泌增加。
　　(2)1日龄SPF雏鸡感染REV后，其胸腺、脾脏、法氏囊TGF-β1mRNA表达分别于感染后7d、7～14d及14d极显著高于对照雏鸡(p＜0.01)，表明SPF雏鸡感染REV初期，TGF-β1前体复合物被激活，TGF-β1mRNA表达急剧增加，雏鸡免疫功能受到抑制;但病毒感染后期胸腺、脾脏TGF-β1 mRNA表达量逐渐降低，法氏囊TGF-β1 mRNA持续升高。
　　(3)1日龄SPF雏鸡感染REV后，其法氏囊、胸腺组织TGF-β1含量分别于7～14d、7～28d极显著高于对照雏鸡(p＜0.01)。但脾脏TGF-β1含量在7～21d极显著低于对照组雏鸡(p＜0.01);表明病毒感染机体后，对各免疫器官TGF-β1分泌作用机制不同。
　　(4)成功制备兔抗鸡TGF-β1多克隆抗体。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 REV研究进展

1．1．1 REV分子生物学特征

1．1．2 RE的流行病学

1．1．3 RE的临床症状与病理变化

1．1．4 REV的免疫抑制作用

1．1．5 RE的鉴别诊断

1．1．6 RE的防治

1．2 TGF-β1研究进展

1．2．1 TGF-β1概述

1．2．2 TGF-β1的信号传导通路

1．2．3 TGF-β1的生物学功能

1．3 本项研究的目的与意义

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 试验动物

2．1．2 REV毒株

2．1．3 主要生物试剂及化学试剂

2．1．4 主要仪器设备

2．2 试验方法

2．2．1 试验动物分组

2．2．2 被检材料采取

2．2．3 检测指标与方法

2．3 数据处理

3 结果与分析

3．1 SPF雏鸡感染REV后外周血液和免疫器官TGF-β1mRNA表达变化

3．1．1 总RNA的提取

3．1．2 活化菌液重组质粒PCR鉴定

3．1．3 标准曲线的绘制

3．1．4 REV感染对SPF雏鸡外周血液TGF-β1和β-actin mRNA表达检测

3．1．5 REV感染SPF雏鸡外周血液TGF-β1mRNA表达变化

3．1．6 REV感染对SPF雏鸡免疫器官TGF-β1和β-actin mRNA表达检测

3．1．7 REV感染SPF雏鸡免疫器官TGF-β1mRNA表达变化

3．2 鸡TGF-β1的原核表达及多克隆抗体制备

3．2．1 鸡TGF-β1基因克隆及序列分析

3．2．2 重组蛋白表达条件优化

3．2．3 SDS-PAGE分析蛋白表达位置

3．2．4 重组蛋白切胶纯化

3．2．5 融合蛋白Western blotting检测

3．2．6 Western blotting检测多克隆抗体的特异性

3．2．7 兔抗鸡TGF-β1多克隆抗体效价测定

3．3 SPF雏鸡感染REV外周血液和免疫器官TGF-β1含量变化

3．3．1 SPF雏鸡感染REV后外周血液TGF-β1含量变化

3．3．2 SPF雏鸡感染REV后免疫器官TGF-β1含量变化

4 讨论

4．1 REV感染对雏鸡外周血液TGF-β1含量的影响

4．2 REV感染对SPF雏鸡免疫器官TGF-β1含量的影响

4．2．1 REV感染对SPF雏鸡免疫器官TGF-β1mRNA表达的影响

4．2．2 REV感染对SPF雏鸡免疫器官TGF-β1含量的影响

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文