ChTLR2信号通路在嗜酸乳杆菌预防雏鸡UC中的作用

摘要

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种危害较大的炎症性肠病，研究发现嗜酸乳杆菌可通过TLR2信号通路发挥对该病的治疗作用。目前，炎症性肠病也已成为兽医临床多发疾病之一，因此探索ChTLR2信号通路在嗜酸乳杆菌防治雏鸡炎症性肠病中的作用及机制具有重要的临床应用价值。本研究以雏鸡为对象，应用HE、免疫组化、ELISA和Real Time PCR等实验方法，对溃疡性结肠炎造模雏鸡（T组）、嗜酸乳杆菌预处理后造模雏鸡（L组）和对照雏鸡（C组）结直肠组织中TLR2、MyD88、IL-8的mRNA含量、TLR2蛋白在结直肠组织中表达和分布、血清中IL-8和IL-10蛋白含量动态变化、以及三组雏鸡的临床症状、实质器官和肠道的组织病理学变化等进行研究。研究结果显示:(1)使用TNBS乙醇混合液对15日龄雏鸡进行灌肠，成功复制雏鸡溃疡性结肠炎模型。(2)雏鸡溃疡性结肠炎病理损伤主要集中于盲肠、盲肠扁桃、结直肠及泄殖腔等部位，且T组雏鸡组织炎症水平高于L组雏鸡。(3)经肠道给予TNBS乙醇混合液后，L组雏鸡结直肠组织中TLR2、MyD88、IL-8 mRNA表达量均不同程度低于T组雏鸡，且L组与T组均高于C组雏鸡。(4）灌肠后，L组雏鸡血清中IL-8蛋白含量不同程度低于T组雏鸡，IL-10含量不同程度高于T组雏鸡。(5)免疫组化结果显示:雏鸡结直肠组织TLR2蛋白主要分布在黏膜炎性区，且随着结直肠病理损伤加重，TLR2蛋白表达量也随之升高。以上结果表明，L组雏鸡炎性病理损伤程度及TLR2及其信号通路相关因子的表达均明显低于T组雏鸡，表明嗜酸乳杆菌可抑制TLR2信号通路的过度激活，减少IL-8释放，以缓解UC对雏鸡造成的病理损伤。通过本研究较系统揭示TLR2信号通路及其通路相关因子在嗜酸乳杆菌预防雏鸡UC中的作用机制，为进一步阐明嗜酸乳杆菌基于PRRs信号通路启动和调节机体免疫应答的机制提供重要参考，为益生菌用于临床UC、CD及IBS等肠道相关疾病的防治提供重要的理论依据。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 溃疡性结肠炎研究进展

1．1．1 溃疡性结肠炎概述

1．1．2 溃疡性结肠炎的影响因素

1．1．3 溃疡性结肠炎临床症状

1．1．4 溃疡性结肠炎预防和治疗的研究进展

1．2 益生菌的研究进展

1．2．1 益生菌的发展史

1．2．2 应用于动物生产的益生菌的种类

1．2．3 乳酸杆菌概述

1．2．4 嗜酸乳杆菌概述

1．2．5 嗜酸乳杆菌与UC

1．3 鸡TLR2研究进展

1．3．1 鸡Toll样受体(ChTLRs)概述

1．3．2 鸡TLR2的研究

1．3．3 TLR2与UC

1．3．4 TLR2与乳酸杆菌

1．4 MyD88研究进展

1．4．1 MyD88概述

1．4．2 MyD88与UC

1．5 白细胞介素8研究进展

1．5．1 白细胞介素8(IL-8)概述

1．5．2 白细胞介素8(IL-8)与UC

1．6 白细胞介素10研究进展

1．6．1 白细胞介素10(IL-10)与概述

1．6．2 白细胞介素10(IL-10)与UC

1．7 本项目研究的目的及意义

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 菌种

2．1．3 主要试剂及仪器

2．1．4 主要溶液配制

2．2 实验方法

2．2．1 嗜酸乳杆菌微胶囊制备

2．2．2 实验动物分组及其处理

2．2．3 被检材料采取及其处理

2．2．4 检测指标与方法

2．3 数据处理

3 结果与分析

3．1 不同处理组雏鸡临床症状和的病理组织学变化

3．1．1 不同处理组雏鸡组织器官的主要临床症状

3．1．2 不同处理组雏鸡结直肠的眼观病理变化

3．1．3 不同处理组雏鸡实质器官和肠道的病理组织学变化

3．1．4 不同处理组雏鸡结直肠组织HE与免疫组化比较

3．2 检测雏鸡结直肠组织TLR2、MyD88、IL-8 mRNA表达Real Time PCR方法建立

3．2．1 总RNA提取

3．2．2 TLR2、MyD88、IL-8和β-actin目的片段RT-PCR扩增电泳结果

3．2．3 重组质粒PCR鉴定

3．2．4 TLR2、MyD88、IL-8和β-actin基因扩增片段序列测定

3．2．5 标准曲线的绘制

3．3 不同处理组雏鸡结直肠组织TLR2、MyD88、IL-8和β-actin mRNA表达变化

3．4 不同处理组雏鸡血清IL-8、IL-10含量变化

3．4．1 不同处理组雏鸡血清IL-8含量变化

3．4．2 不同处理组雏鸡血清IL-10含量变化

4 讨论

4．1 嗜酸乳杆菌减轻UC对雏鸡的损伤作用

4．2 嗜酸乳杆菌对UC雏鸡结直肠TLR2表达的影响

4．3 嗜酸乳杆菌对UC雏鸡结直肠MyD88表达的影响

4．4 嗜酸乳杆菌对UC雏鸡结直肠及血清IL-8表达的影响

4．5 嗜酸乳杆菌对UC雏鸡血清IL-10的影响

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文