声明
摘要
1前言
1．1．2硫化氢对健康的危害
1．1．3硫化氢与细胞死亡的研究进展
1．2 ceRNA调控网络研究进展
1．2．1 ceRNA调控网络的成员及其作用机制
1．2．2非编码RNA与疾病关系的研究进展
1．3细胞凋亡与程序性坏死的研究进展
1．4研究的目的与意义
2材料与方法
2．1主要仪器与试剂
2．1．1主要仪器
2．1．2主要试剂
2．2试验方法
2．2．1试验动物分组
2．2．2气管组织显微和超微结构观察
2．2．3气管组织lncRNA组学检测
2．2．4鸡气管组织和LMH细胞中miRNA表达的检测方法
2．2．6蛋白提取与Western blot(WB)法检测
2．2．7鸡LMH传代细胞培养
2．2．8 H2S暴露对LMH细胞活性影响的检测方法
2．2．10 miR-15a与A20靶向关系的双荧光素酶报告基因系统验证
2．2．11 LncRNA3037过表达／抑制LMH细胞模型的建立
2．2．12 LncRNA3037与miR-15a靶向关系的双荧光素酶报告基因系统验证方法
2．2．13流式细胞术检测细胞死亡的方法
2．2．14细胞核与细胞质内RNA分离方法
2．3试验数据的统计与分析
3结果与分析
3．1 H2S暴露对鸡气管组织病理组织学影响的观察结果
3．2鸡气管组织中lncRNA组的测序结果与验证
3．3 LncRNA3037与miR-15a靶向调控关系的验证结果
3．3．1 LncRNA3037细胞内的定位分析结果
3．3．3 LncRNA3037与miR-15a靶向关系的双荧光素酶报告基因系统验证结果
3．3．4过表达和敲低IncRNA3037与miR-15a验证两者调控关系的检测结果
3．4 miR-15a与A20靶向关系的预测结果
3．6过表达和敲低miR-15a后靶基因A20与BCL2表达的检测结果
3．7 H2S暴露对气管组织细胞凋亡与程序性坏死相关蛋白表达影响的检测结果
3．8 H2S暴露对鸡LMH细胞影响的检测结果
3．8．1 H2S暴露对LMH细胞活性影响的检测结果
3．8．2 H2S暴露对LMH细胞凋亡与程序性坏死影响的检测结果
3．8．3 H2S暴露对LMH细胞lncRNA与miRNA差异表达分析的结果
3．9．2过表达miR-15a对LMH细胞凋亡与程序性坏死通路中蛋白表达影响的检测结果
3．9．3敲低miR-15a对H2S诱导的细胞凋亡与坏死水平影响的检测结果
3．10敲低lncRNA3037和miR-15a对细胞凋亡与程序性坏死影响的检测结果
3．10．2敲低lncRNA3037和miR-15a对细胞凋亡与程序性坏死通路中蛋白表达影响的检测结果
4讨论
4．1 H2S暴露对气管组织损伤的影响
4．2 H2S暴露对lncRNA组学的影响
4．3．2 mir-15a对A20与BCL2表达的影响
4．4 LncRNA3037作为mir-15a分子海绵参与H2S诱导的细胞凋亡与程序性坏死
4．4．2 LncRNA3037／miR-15a通过靶向A20调控细胞程序性坏死
5结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
