声明
摘要
1引言
1．1研究目的与意义
1．2国内外研究进展
1．2．1植物雄性不育的类型
1．2．2洋葱雄性不育的研究进展
1．2．3 AMS基因的结构与功能
1．3技术路线
2材料与方法
2．1试验材料
2．1．1植物材料
2．1．2细菌菌株与质粒载体
2．1．3主要试剂与仪器
2．1．4引物
2．2试验方法
2．2．1 AcAMS基因的克隆
2．2．2 AcAMS生物信息学分析
2．2．3 AcAMS基因的表达模式分析
2．2．4亚细胞定位
2．2．5植物表达载体的构建
2．2．6遗传转化
2．2．7转基因拟南芥株系及ams突变体的表型分析
2．2．8与绒毡层发育相关基因表达模式分析
2．2．9 CRISPR／Cas9编辑洋葱AcAMS
2．2．10病毒诱导洋葱内源基因沉默的初步研究
3结果与分析
3．1 AcAMS基因的克隆及生物信息学分析
3．1．1 AcAMS基因全长的克隆
3．1．2 AcAMS理化性质分析及结构预测
3．1．3 AcAMS与其他AMS的同源性比对
3．1．4 AMS进化树分析
3．2 AcAMS的基因表达模式分析
3．3亚细胞定位
3．3．1瞬时表达载体的构建
3．3．2亚细胞定位
3．4植物表达载体的构建及功能分析
3．4．1过表达载体的构建
3．4．2重组质粒转化农杆菌
3．4．3转基因阳性植株的筛选鉴定
3．4．4 AcAMS功能分析
3．5 CRISPR／Cas9编辑洋葱AcAMS
3．5．1洋葱基因组DNA的PCR及引物设计
3．5．2 CRISPR／Cas9敲除载体的构建
3．5．3 pHUN411-AcAMS转化农杆菌
3．6洋葱病毒诱导基因沉默体系的初步探索
3．6．1洋葱AcPDS与AcAMS部分片段的克隆及载体构建
3．6．2 pTRV2-AcPDS、pTRV2-AcAMS转化农杆菌
4讨论
4．1 AcAMS亚细胞定位分析
4．2 AcAMS基因表达模式分析
4．3 AcAMS与洋葱细胞质雄性不育
4．4洋葱VIGS体系的建立
4．5下一步工作计划
5结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
