声明
摘要
1引言
1．1香鳞毛蕨研究进展
1．1．1香鳞毛蕨植物形态与生境特殊性
1．1．2香鳞毛蕨的化学成分研究
1．1．3香鳞毛蕨的药用价值
1．2转录因子MYC2研究进展
1．2．1转录因子简介
1．2．2转录因子MYC2的表达调控
1．2．3转录因子MYC2与萜类代谢
1．3植物萜类化合物研究进展
1．3．1萜类化合物简介
1．3．2植物萜类代谢过程
1．3．3香鳞毛蕨萜类化合物研究进展
1．4本研究目的意义及技术路线
1．4．1研究目的意义
1．4．2技术路线
2材料与方法
2．1试验材料
2．2主要试剂与仪器
2．3香鳞毛蕨MYC2基因的克隆
2．3．1总RNA的提取
2．3．2 cDNA的合成
2．3．3香鳞毛蕨MYC2基因核心片段的获得
2．3．4香鳞毛蕨MYC2基因cDNA 5'端片段的获得(5'-RACE)
2．3．5香鳞毛蕨MYC2基因cDNA 3'端片段的获得(3'-RACE)
2．3．6香鳞毛蕨MYC2基因全长的获得
2．3．7 DfMYC2基因开放阅读框架(ORF)的克隆
2．4 DfMYC2基因的生物信息学分析
2．5 DfMYC2基因的特异性表达
2．5．1香鳞毛蕨不同部位材料的制备
2．5．2香鳞毛蕨MeJA处理材料的制备
2．5．3香鳞毛蕨MYC2基因实时荧光定量PCR分析
2．6 DfMYC2基因的异源表达及功能分析
2．6．1 DfMYC2基因植物表达载体的构建
2．6．2 DfMYC2基因的遗传转化
2．6．3转基因拟南芥的PCR鉴定
2．6．4 DfMYC2基因过表达植株表型观察
2．7 AtMYC2基因的敲除
2．7．1 AtMYC2基因植物表达载体的构建
2．7．2 AtMYC2缺失型植株的获得
2．7．3 AtMYC2缺失型植株的PCR鉴定
2．7．4 AtMYC2缺失型植株的表型观察
2．8 DfMYC2基因对AtMYC2缺失型植株的转化
2．9倍半萜合酶基因TPS11和TPS21片段获得
2．10 DfMYC2基因的亚细胞定位
3结果与分析
3．1香鳞毛蕨MYC2基因的筛选、克隆及生物信息学分析
3．1．1总RNA的提取
3．1．2香鳞毛蕨MYC2基因5'端和3'端片段的克隆(5'、3'RACE)
3．1．3香鳞毛蕨MYC2基因全长的获得
3．1．4 DfMYC2基因开放阅读框架的克隆
3．1．5 DfMYC2基因cDNA序列同源性分析
3．1．6 DfMYC2基因的蛋白序列分析及同源模建
3．2 DfMYC2基因实时荧光定量PCR分析
3．2．1 DfMYC2基因的相对表达
3．3 DfMYC2过表达型拟南芥的构建
3．3．1表达载体和目的基因的双酶切、连接及验证
3．3．2 DfMYC2过表达纯合体拟南芥的获得
3．3．3转基因拟南芥的PCR鉴定
3．4 AtMYC2缺失型拟南芥的获得与鉴定
3．5 DfMYC2互补AtMYC2缺失型拟南芥的获得与鉴定
3．6不同类型拟南芥表型观察
3．7 4种类型拟南芥TPS11和TPS21基因相对表达量比较
3．8 DfMYC2亚细胞定位
4讨论
4．1香鳞毛蕨转录因子MYC2的选择
4．2 DfMYC2基因的表达分析
4．3 DfMYC2基因的生物信息学分析及亚细胞定位
4．4 DfMYC2基因与AtMYC2基因的相关性
5结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
