低温条件下黑龙江林蛙肝脏蛋白及代谢酶的适应性变化

摘要

本文研究了低温条件下黑龙江林蛙肝脏蛋白质、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖6-磷酸脱氢酶(G6PDH)及酯酶(EST)的适应性变化，以探讨黑龙江林蛙冬眠期低温耐受的机制，为两柄类低温生物学和比较生理学的深入研究提供理论参考和实验依据。本研究选取黑龙江省伊春地区黑龙江林蛙为研究材料，观察黑龙江林蛙在环境温度为室温(14℃)、1℃和-2℃条件下的存活率，并采用2-D native-PAGE/SDS-PAGE电泳、酶活性比色法、同工酶电泳等生化技术检测不同温度环境下肝脏蛋白质及代谢酶的活性变化。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

1绪论

1.1生物体低温条件下的体温调节

1.2变温动物的低温耐受调节机制

1.2.1适应策略

1.2.2结冰激活蛋白

1.2.3抗冻保护剂

1.2.4抗氧化能力

1.2.5低温诱导基因表达

1.2.6代谢阻滞和蛋白降解的抑制

1.2.7低温生物学相关技术进展

1.2.8两栖类低温耐受的研究模型

1.3国内两栖类低温耐受的研究

1.3.1两栖类冬眠的相关研究

1.4肝脏在体温调节中的作用

1.5 2-D native-PAGE/SDS-PAGE电泳技术

1.6课题设计

1.6.1本研究立题依据

1.6.2预期目标

2材料与方法

2.1主要试剂

2.2主要仪器

2.3试剂配制

2.4试验材料

2.5低温条件及其持续时间对黑龙江林蛙存活率的测定

2.6黑龙江林蛙肝脏SOD、LDH、G6PDH及EST的测定

2.6.1 SOD酶活性检测

2.6.2 LDH酶活力检测

2.6.3 LDH、G6PDH、EST同工酶电泳

2.7黑龙江林蛙肝脏蛋白的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳

2.8黑龙江林蛙肝脏蛋白的2-D native-PAGE/SDS-PAGE电泳

2.9本章小结

3结果

3.1低温条件下黑龙江林蛙存活率比较

3.2低温条件下黑龙江林蛙几种酶活性分析

3.2.1 SOD、LDH酶活性分析

3.2.2室温组和1℃组黑龙江林蛙肝脏LDH同工酶图谱

3.2.3室温组和1℃组黑龙江林蛙G6PDH 同工酶图谱

3.2.4室温组和1℃组黑龙江林蛙肝脏EST 同工酶图谱

3.3室温组和1℃组黑龙江林蛙肝脏蛋白PAGE电泳图谱

3.3.1 PAGE分离胶浓度选择

3.3.2 TotalLab v2005图像分析软件分析6％浓度分离胶PAGE电泳图

3.3.3室温组和1℃组黑龙江林蛙肝脏蛋白PAGE电泳图谱比较分析

3.4室温组和1℃组黑龙江林蛙肝脏蛋白2-D native—PAGE/SDS-PAGE电泳图谱分析

3.4.1 2-D native-PAGE/SDS-PAGE重现性

3.4.2 2-D native-PAGE/SDS-PAGE分离胶选择

3.4.3一向PAGE图谱与2-D native-PAGE/SDS-PAGE电泳图对应分析

3.4.4室温组和1℃组黑龙江林蛙肝脏2-D native-PAGE/SDS-PAGE电泳图谱比较分析

3.5本章小结

4讨论

4.1黑龙江林蛙耐低温能力

4.2黑龙江林蛙肝脏几种酶活性分析

4 2.1 SOD酶活性分析

4.2.2 LDH酶活性分析

4.2.3 G6PDH酶活性分析

4.2.4 EST酶活性分析

4.3黑龙江林蛙肝脏蛋白PAGE电泳图谱分析

4.4黑龙江林蛙肝脏蛋白2-D native-PAGE/SDS-PAGE电泳分析

4.4.1电泳条件

4.4.2影响因素

4 5黑龙江林蛙肝脏蛋白质电泳图谱的变化区域分析

结论

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢