亚牛磺酸、透明质酸酶对马鹿精子体外获能影响的研究

摘要

精子在受精前必须获能，这是哺乳动物独具的特性。所以精子体外诱导获能是体外受精研究中必须首先解决的问题之一。本研究以马鹿为试验对象，开展了亚牛磺酸、透明质酸酶对鹿精子体外获能影响的研究。以期筛选出亚牛磺酸、透明质酸酶在实践中具有良好效果的使用方法及用量。 对马鹿精子，使用上浮法诱导其获能，通过顶体染色测定精子的顶体反应率作为主要指标，同时以精子活率为辅助指标，对亚牛磺酸、透明质酸酶对马鹿精子的获能效果进行评价。研究结果如下： 1、在BO培养基中加入30～200μmol/L亚牛磺酸可以提高马鹿精子体外获能的水平，其中适宜的亚牛磺酸浓度为100μmol/L。在TALP培养基中加入30～20μmol/L亚牛磺酸可以提高马鹿精子体外获能的水平，其中适宜的亚牛磺酸浓度为100μmol/L。亚牛磺酸在TALP培养基中的使用效果优于在BO培养基中的使用效果。 2、在BOt音养基中加入0.5～1.5g/L透明质酸酶可以提高马鹿精子体外获能的水平，其中适宜的透明质酸酶浓度为1g/L。在TALP培养基中加入0.5～1.5g/L透明质酸酶可以提高马鹿精子体外获能的水平，其中适宜的透明质酸酶浓度为1g/L。透明质酸酶在BO培养基中的使用效果优于在TALP培养基中的使用效果。 3、在BO培养基中加入30～200μmol/L亚牛磺酸可以延长获能后马鹿精子的活率。在TALP培养基中加入30～200μmol/L亚牛磺酸可以延长获能后马鹿精子的活率。 4、透明质酸酶对获能后马鹿精子活率无影响。

目录

文摘

英文文摘

声明

1绪论

1.1引言

1.2哺乳动物精子体外获能研究概况

1.3精子获能机理

1.4影响精子体外获能的因素

1.4.1动物种类与精子来源部位

1.4.2温度、pH值、渗透压

1.4.3培养液成分

1.4.4精子的预处理

1.5精子体外获能的处理方法

1.5.1 HIS

1.5.2 Ca2+法

1.5.3氨基多糖

1.5.4血清白蛋白

1.5.5其它

1.6获能精子的检测

1.6.1去能因子(DF)鉴定法

1.6.2测验精子的呼吸能

1.6.3超激活运动(HAM)观察法

1.6.4顶体反应检测法

1.6.5精子穿卵试验(SPA)

1.6.6金霉素荧光染色法(CTC)

1.6.7相差显微镜检查法

1.6.8三色染色法

1.6.9电子显微镜检查法

1.7亚牛磺酸、牛磺酸

1.7.1对细胞的保护作用

1.7.2影响繁殖性能

1.8透明质酸酶

1.8.1透明质酸酶活性的调节

1.8.2精子中的透明质酸酶

1.9研究的目的

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1精液来源

2.1.2主要仪器设备

2.1.3主要试剂、药品

2.1.4主要操作用液

2.2精子解冻

2.3诱发马鹿精子体外获能

2.4诱发获能马鹿精子顶体反应

2.5精子的检测方法

2.5.1密度检测

2.5.2精子低渗抗性检测

2.5.3三色染色法检查精子的顶体状态

2.6试验方案

2.6.1亚牛磺酸对马鹿精子获能的影响的研究方案

2.6.2透明质酸酶对马鹿精子获能的影响的研究方案

2.6.3精子获能后活率的检测

3试验结果

3.1亚牛磺酸对马鹿精子获能的影响

3.1.1亚牛磺酸在BO培养基使用浓度的筛选

3.1.2亚牛磺酸在TALP培养基使用浓度的筛选

3.1.3亚牛磺酸在获能液(BO培养基)中使用浓度的筛选

3.1.4亚牛磺酸在获能液(TALP培养基)中使用浓度的筛选

3.2透明质酸酶对马鹿精子获能的影响

3.2.1透明质酸酶在BO培养基中使用浓度的筛选

3.2.2透明质酸酶在TALP培养基中使用浓度的筛选

3.2.3透明质酸酶获能液(BO培养基)中使用浓度的筛选

3.2.4透明质酸酶获能液(TALP培养基)中使用浓度的筛选

3.3亚牛磺酸对精子活率的影响

3.3.1不同浓度亚牛磺酸(BO培养基)对精子活率的影响

3.3.2不同浓度亚牛磺酸(TALP培养基)对精子活率的影响

3.4透明质酸酶对精子活率的影响

3.4.1不同浓度透明质酸酶(BO培养基)对精子活率的影响

3.4.2不同浓度透明质酸酶(TALP培养基)对精子活率的影响

4分析与讨论

4.1亚牛磺酸对马鹿精子获能的作用

4.2亚牛磺酸对马鹿精子活率的作用

4.3透明质酸酶对马鹿精子体外获能的作用

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢