锈革孔菌科三种真菌对植物病原菌抑制作用的研究

摘要

本文以锈革孔菌科的3种(Phellinus baumii、 Phellinus linteus和lnonorus obliguus)真菌的液体发酵产物——菌丝体和发酵液为研究对象，对其主要组分的抑菌活性进行研究，采用萃取分离技术对活性物质进行了分离纯化，主要得出以下结论:
　　1.采用生长速率法测定了3种真菌不同发酵时间的产物对7种（CytosPorachrysosperma, Guiqnardia laricina, Bipolaris maydis,Fusarium oxysporum,Helminthosporium carposaprum，Cladosporium fulvum, Magnaporthe grisea)植物病原菌的抑菌作用，结果发现:在相同条件下不同发酵时间的发酵产物对7种植物病原菌均有抑制作用;比较同种供试菌株不同发酵时间产物对病原菌的抑菌活性发现:抑菌活性随着发酵时间的增加而增加，Phellinus baumii、P.linteus在发酵的第20d达到最高，Inonorus obliguus在发酵的第23d达到最高。P.baumii和P.linteus发酵时间为20d的发酵产物对CytosPora chrysosperma的抑制率最高，分别为:56.20％、60.21％，Inonorusobliguus发酵时间为23d的发酵产物对CytosPora chrysosperma，Guiqnardia laricina的抑制率最高，分别为:75.21％、57.41％。
　　2.对3种真菌代谢抑菌活性物质最佳发酵时间的发酵产物进行分离，并对分离物质的抑菌活性进行测定。结果表明:(Phellinus baumii、P.linteus和lnonorus obliguus)的发酵液提取物的抑菌活性明显高于菌丝体提取物，主要的抑菌活性物质存在于发酵液中。经高温高压处理发酵液，抑菌活性和未经处理发酵液的抑菌活性无明显变化， P.baumiiP.linteus和I.obliguus发酵液醇提物的抑菌活性最高。
　　3.设置4个醇沉终浓度:30％、50％、70％、90％对3种真菌发酵液多糖进行分级并测定分级后多糖的抑菌活性。结果表明，醇沉终浓度为50％的P.baumii发酵液多糖、醇沉终浓度为30％的P.linteus发酵液多糖和醇沉终浓度为70％的I.obliguus发酵液多糖为各供试醇沉终浓度中抑菌率最高。
　　4.采用逐级稀释法测定3种真菌发酵液多糖对病原菌生长的最小抑菌浓度，以生物农药儿茶素作为对照。P.baumii发酵上清液醇沉终浓度为50％多糖和P.linteus发酵上清液醇沉终浓度为30％多糖对CytosPora chrysosperma菌丝的最小抑菌浓度分别为:85mg/ml、80mg/ml;I.obliguus发酵上清液醇沉终浓度为70％多糖对CytosPorachrysosperma，Guiqnardia laricina菌丝的最小抑菌浓度分别为65mg/ml、60mg/ml;儿茶素对CytosPora chrysosperma，Guiqnardia laricina菌丝的最小抑菌浓度分别为:75mg/ml、55mg/ml。P.baumii、P.linteus和I.obliguus发酵上清液多糖对CytosPorachrysosperma的孢子萌发无明显抑制作用;I.obliguus发酵上清液多糖对Guiqnardialaricina的孢子有明显的抑制作用，当浓度为55mg/ml时能抑制50％以上的孢子萌发。

目录

摘要

1 绪论

1．1 高等真菌活性物质的研究概况

1．1．1 杀虫活性研究

1．1．2 抑菌活性研究

1．1．3 杀线虫活性研究

1．1．4 抗病毒活性研究

1．1．5 其他活性研究

1．2 高等真菌液体发酵的研究概况

1．3 鲍氏层孔菌、裂蹄木层孔菌和桦褐孔菌的研究概况

1．3．1 鲍氏层孔菌和裂蹄木层孔菌的研究进展

1．3．2 桦褐孔菌的研究进展

1．4 本研究的目的和意义

2 三种药用真菌的代谢抑菌物质发酵周期的测定

2．1 试验材料

2．1．1 供试材料

2．1．2 供试病原菌

2．1．3 培养基

2．1．4 主要仪器

2．2 研究方法

2．2．1 菌丝的活化

2．2．2 菌体的液体发酵培养

2．2．3 培养不同时间发酵产物的抑菌试验

2．2．4 测定培养不同时间菌丝体的生物量

2．3 结果与分析

2．3．1 鲍氏层孔菌对不同病原菌的抑菌活性比较及最佳发酵周期的测定

2．3．2 裂蹄木层孔菌对不同病原菌抑菌活性的比较及最佳发酵周期的测定

2．3．3 桦褐孔菌对不同病原菌抑菌活性的比较及最佳发酵周期的测定

2．3．4 三种药用真菌不同发酵时间的菌丝体生物量变化

2．4 本章小结

3 三种药用真菌抑菌活性物质所在组分的研究

3．1 材料与试剂

3．1．1 供试病原菌

3．1．2 主要试剂

3．2 研究方法

3．2．1 三种药用真菌的液体发酵

3．2．2 菌丝体的不同组分的抑菌活性测定

3．2．3 发酵上清液的抑菌活性测定

3．3 结果与分析

3．3．1 鲍氏层孔菌发酵产物的不同处理对杨树烂皮病抑菌活性的比较

3．3．2 裂蹄木层孔菌发酵产物的不同处理对杨树烂皮病抑菌活性的比较

3．3．3 桦褐孔菌发酵产物的不同处理对杨树烂皮病抑菌活性的比较

3．3．4 桦褐孔菌发酵产物的不同处理对落叶松枯稍病抑菌活性的比较

3．4 本章小结

4 三种药用真菌主要抑菌活性物质的分析及纯化

4．1 材料与试剂

4．1．1 供试病原菌

4．1．2 主要试剂

4．2 研究方法

4．2．1 三种药用真菌最佳发酵周期发酵上清液的制备

4．2．2 三种药用真菌不同发酵时间的发酵上清液粗多糖含量的变化

4．2．3 三种药用真菌最佳发酵周期的发酵上清液粗多糖的提取

4．2．4 三种药用真菌最佳发酵周期的发酵上清液粗多糖的分级纯化

4．2．5 不同醇沉级别多糖的抑菌活性测定

4．2．6 抑菌活性所在级别多糖的最小抑菌浓度的测定

4．3 结果与分析

4．3．1 三种药用真菌不同发酵时间发酵上清液粗多糖含量的变化

4．3．2 三种药用真菌发酵上清液分级醇沉多糖的得率

4．3．3 三种药用真菌发酵上清液不同醇沉级别多糖的蛋白含量

4．3．4 醇沉分级多糖的抑菌比较

4．3．5 抑菌活性所在级别多糖的最小抑菌浓度的测定

4．4 本章小结

结论

结论

讨论

参考文献

附录

读学位期间发表的学术论文

致谢

声明