紫草、三七提取物与CG12744基因对果蝇肠道免疫的影响

摘要

肠道免疫是果蝇抵御外界病原体入侵的重要防线。为研究中药紫草与三七对果蝇肠道损伤的保护作用与机制，利用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulphate，SDS)与百草枯(Pamquat)诱导果蝇肠道损伤，分析果蝇生存率。构建由SDS诱导的果蝇肠道损伤模型，通过免疫染色法检测果蝇肠道前体细胞数量、处于分裂期的干细胞数量、肠道上皮细胞内活性氧自由基水平与死亡细胞的数量，并分析肠道形态学变化。实验结果表明喂食紫草与三七提取物均可以明显提高果蝇的生存率、显著抑制肠道损伤引起的前体细胞与肠道干细胞的过度增殖、降低肠道上皮细胞的死亡;此外，紫草与三七提取物均可以降低肠道上皮细胞内活性氧的水平，保护和维持肠道形态。实验证明，紫草与三七提取物对SDS与Paraquat诱导的果蝇肠道损伤均具有修复作用。
　　由老龄化引起的干细胞功能衰退会引发多种疾病。为了研究果蝇CG12744基因对肠道于细胞的影响机制，喂食Paraquat、SDS和NaCl检测CG12744低表达突变体果蝇生存率，半定量PCR检测果蝇老龄化过程中各年龄点CG12744蛋白质的表达情况，免疫染色法检测果蝇老龄化肠道中前体细胞和处于分裂期的干细胞的数量。实验结果表明，在喂食Paraquat后有4种CG12744低表达突变体生存率明显降低，喂食SDS后有2种CG12744低表达突变体生存率降低，而在喂食NaCl后CG12744低表达突变体生存率没有明显变化;在果蝇的老龄化过程中CG12744的表达量呈现增加的趋势;老龄化过程中，CG12744低表达突变体中肠内出现前体细胞和干细胞的过度增殖。实验结果证明CG12744基因在果蝇老龄化的过程中起到不可或缺的作用，为进一步分析果蝇CG12744基因在老龄化的功能奠定了基础。

目录

摘要

1 绪论

1．1 黑腹果蝇

1．2 果蝇肠道的研究进展

1．2．1 果蝇肠道的基本结构

1．2．2 果蝇肠道细胞

1．2．3 果蝇中肠干细胞的分裂与增殖

1．2．4 诱导果蝇肠道干细胞分化的因素

1．2．5 果蝇肠道免疫

1．3 中药简要介绍

1．3．1 紫草的研究进展

1．3．2 三七的研究进展

1．4 果蝇的CG12744基因

1．5 实验的目的与意义

2 材料与方法

2．1 果蝇的品系

2．2 药材与试剂

2．3 实验仪器

2．4 果蝇培养基的配制

2．5 中药提取液与培养基的制备

2．6 紫草与三七对果蝇肠道损伤的保护作用

2．6．1 果蝇生存率的测定

2．6．2 果蝇肠道前体细胞数目与形态的测定

2．6．3 果蝇肠道分裂期干细胞数目的测定

2．6．4 果蝇肠道上皮细胞死亡数目和ROS水平的测定

2．6．5 果蝇肠道形态学观察

2．7 CG12744基因对果蝇肠道免疫的影响

2．7．1 CG12744突变体Paraquat处理后生存率的测定

2．7．2 CG12744突变体SDS处理后生存率的测定

2．7．3 CG12744突变体NaCl处理后生存率的测定

2．7．4 老龄化过程中半定量检测CG12744的表达量的测定

2．7．5 老龄化过程中果蝇肠道前体细胞数目的测定

2．7．6 老龄化过程中果蝇肠道分裂期干细胞数目的测定

2．8 统计学分析

3 结果与分析

3．1 紫草与三七提取物对果蝇肠道免疫的影响

3．1．1 紫草与三七提取物对致炎因子诱导后果蝇生存率的影响

3．1．2 紫草与三七提取物对果蝇肠道前体细胞数量与形态的影响

3．1．3 紫草与三七提取物对果蝇肠道分裂期干细胞数量的影响

3．1．4 紫草与三七提取物对果蝇肠道死亡细胞数量和细胞内ROS水平的影响

3．1．5 紫草与三七提取物对果蝇肠道形态学影响

3．2 CG12744基因对果蝇肠道免疫的影响

3．2．1 CG12744突变体Paraquat处理后生存率的分析

3．2．2 CG12744突变体SDS处理后生存率的分析

3．2．3 CG12744突变体NaCl处理后生存率的分析

3．2．4 老龄化过程中果蝇不同年龄点CG12744表达量检测

3．2．5 老龄化过程中CG12744基因对果蝇肠道前体细胞数量的影响

3．2．6 老龄化过程中CG12744基因对果蝇肠道分裂期干细胞数量的影响

4 讨论

4．1 紫草与三七提取物对果蝇肠道免疫的影响

4．2 CG12744基因对肠道免疫功能的影响

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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