MicroRNA PC-5p-1090靶向SOX9基因

摘要

SOX9基因属于SOX基因家族，与哺乳动物胚胎发育、性别决定、人类遗传综合征和恶性肿瘤的发生有密切关系。MicroRNA PC-5P-1090(PC-1090)是在鹿茸生长点茸皮中新发现的小分子RNA。为了验证SOX9基因是否是PC-1090的直接作用靶基因，本研究构建含有SOX93'UTR的野生型重组质粒(pMIR-Report-SOX9-3'UTR-WT)和突变型重组质粒(pMIR-Report-SOX9-3'UTR-MUT);将pMIR-Report-SOX9-3'UTR-WT、pMIR-Report-SOX9-3'UTR-MUT分别与1090mimics和control mimics共转染293T细胞，Western blot检测转染后293T细胞中荧光素酶基因的表达量;分别以1090mimics与control mimics转染Huh-7细胞(表达内源性的SOX9)，Western blot检测转染后Huh-7细胞中SOX9蛋白表达的变化。
　　结果显示:经测序证实荧光素酶报告载体pMIR-Report-SOX9-3'UTR-WT和pMIR-Report-SOX9-3'UTR-MUT构建成功;Western blot结果显示，共转染PC-1090mimics与SOX93'UTR野生型重组质粒的293T细胞组，荧光素酶的表达量明显下降，而其他对照组荧光素酶的表达量无显著变化;与转染control mimics的Huh-7细胞组相比，转染1090mimics的Huh-7细胞中SOX9蛋白的表达显著降低。
　　结论为PC-1090具有生物学功能，且和SOX93'UTR上的位点特异性结合，靶向负调控SOX9基因的表达。

目录

摘要

1 绪论

1．2 SOX9与疾病的相关性

1．2．1 SOX9与骨骼发育不良的相关性

1．2．2 SOX9与性别发育不良的相关性

1．2．3 SOX9与癌症的相关性

1．2．4 负调控SOX9表达的因子

1．3 microRNA的产生及功能

1．3．1 小RNA分子：microRNA的发现

1．3．2 microRNA的生物合成过程、作用机制及主要功能

1．4 mRNA的3’UTR区的结构和主要功能

1．5 MicroRNA PC-5p-1090

2 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 实验细胞株

2．1．2 主要仪器设备

2．1．3 主要试剂

2．2 方法

2．2．3 细胞培养及处理

2．2．4 荧光素酶报告检测实验

2．2．5 PC-1090过表达情况下内源SOX9检测实验

2．2．6 Western blot实验

2．3 数据处理

3 实验结果

3．3 PCR扩增SOX9 3’UTR序列

3．4 测序结果

3．5 荧光素酶报告检测结果

3．6 过表达PC-1090对内源SOX9的影响结果

4 讨论

4．2 转染差异性对实验结果的影响

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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