光诱导表达载体的构建及其在盐藻除草剂抗性转化中的应用

摘要

该实验室实践证明,对盐藻使用除草剂草丁膦筛选体系,效果明显.为对盐藻进行转基因研究,我们设计并克隆了一种光诱导的盐藻表达载体,用于盐藻的瞬时转化和稳定转化.在该载体中我们将外源的bar基因插入到Dunaliella bardawil的CBR基因的启动子(强光诱导表达)之下,并在bar基因下游接上CBR基因的终止子(3'-UTR,3'-untranslated region),构成一个bar基因的表达盒.作者在盐藻的培养等生物学特性的研究基础上,建立了两种盐藻转化方法,即电激转染和磷酸钙共沉淀转染.利用自己构建的盐藻光诱导载体,分别通过电激转染和磷酸钙共沉淀转染,进行盐藻的除草剂抗性转化,从细胞生物学和分子生物学的角度对两种转化方法进行了比较和分析,为转基因盐藻生物反应器研究初步建立了两种比较稳定的转化方法.该研究论文分两部分,第一部分阐述盐藻光诱导表达载体pPB3R2a的分子克隆过程;第二部分阐述对盐藻基本生物学特性的研究和用载体pPB3R2a转化野生盐藻Dunaliella bardawil赋予其除草剂抗性以及对Dunaliella.Bardawil转基因方面的研究工作,包括转基因的检测等.