冬凌草甲素对人结肠癌HCT-8细胞株的抑制生长及诱导凋亡的作用

摘要

背景与目的:大肠癌是常见的恶性肿瘤之一,近年来发病率迅速增长.中国大肠癌的发病率已从30年前的10/10万上升到现在的30/10万,在恶性肿瘤的排名中,从第6位上升到第3位.大量的研究资料表明冬凌草甲素对多种肿瘤具有生长抑制作用,但冬凌草甲素对结肠癌的作用国内外尚未见有报道.该课题拟通过体外实验探讨冬凌草甲素诱导人结肠癌细胞株HCT-8凋亡作用的机理.技术路线为:用MTT法测定不同浓度冬凌草甲素对细胞的生长抑制作用,采用HE染色法观察冬凌草甲素诱导人结肠癌细胞株HCT-8凋亡的形态学变化;以免疫组化技术检测凋亡相关蛋白caspase3和survivin的表达情况,利用流式细胞仪测定不同浓度的冬凌草甲素作用不同时间诱导细胞凋亡的凋亡率及细胞周期的变化,以期探讨冬凌草甲素诱导细胞凋亡的作用机理,从而为冬凌草甲素作为抗肿瘤药物应用于临床提供理论依据.方法:1.细胞株选用人结肠癌细胞株HCT-8为材料;2.MTT比色法测定不同浓度冬凌革甲素对结肠癌细胞的生长抑制率;3.HE染色法观察5μg/ml冬凌草甲素作用48小时后的细胞形态学变化;.4.免疫组化SP法检测5μg/ml冬凌草甲素作用48小时后实验组与对照组细胞凋亡相关基因Caspase3、Survivin的蛋白表达变化;5.流式细胞仪检测不同处理组的周期时相变化及凋亡情况;6.实验数据经SPSS10.0统计软件处理,采用正态性检验,单因素方差分析,独立样本t检验,χ<'2>检验,以α=0.05为检验水准.结论:1 冬凌草甲素对人结肠癌细胞株HCT-8的生长具有明显的生长抑制作用,且在一定浓度范围内存在量效依赖关系.2 冬凌草甲素作用于HCT-8细胞48小时后,细胞中Caspase3蛋白表达明显升高,Survivin蛋白表达明显下降.3 冬凌草甲素可将结肠癌HCT-8细胞阻滞于G<,2>/M期,且可通过caspase途径诱导凋亡,其阻滞周期能力及凋亡率在一定范围内呈剂量、时间依赖性.4 冬凌草甲素可望作为抑制生长、诱导凋亡的抗肿瘤药物应用于肿瘤的化学治疗.

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摘要

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前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图

综述部分:综述

参考文献

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