异基因造血干细胞移植中巨细胞病毒的检测及临床意义

摘要

背景与目的:尽管目前诊断CMV手段日臻完善,但诊断方法多种多样,哪种方法更能简便快捷、灵敏可靠地早期诊断,从而进行早期干预性治疗争议很大.该研究分别应用ELISA、流式细胞仪、荧光定量PCR检测巨细胞病毒IgG、IgM抗体、pp65抗原、DNA负荷定量,旨在探讨HCMV的早期有效诊断方法.材料与方法:该研究分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清巨细胞病毒抗体IgG、IgM;流式细胞仪检测巨细胞病毒抗原pp65;荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)核酸扩增技术检测血浆巨细胞病毒DNA负荷量.选择造血干细胞移植术受者(移植组)预处理前常规检测IgG、IgM抗体,排除IgM抗体阳性移植患者.于回输当天、回输后每10天左右;正常造血干细胞移植健康供者(正常组),于粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员之前;长期化疗的白血病患者(化疗组)于化疗后白细胞升至2.0×109/L时,同时检测巨细胞病毒血清IgG、IgM抗体、粒细胞pp65抗原、血浆DNA负荷量.ELISA采用间接法,待测抗原包被微孔、洗板、加抗原-酶结合复合物、孵育后洗板,加底物液后置室温暗处显色,用酶联免疫检测仪(波长450nm)测定OD值.流式细胞仪检测采用单色间标法,取标本分离单个核细胞、固定、破膜、分别加入pp65抗体和小鼠IgG1抗原(对照),再加FITC标记的兔抗鼠IgG1抗体(二抗),用流式细胞仪检测阳性细胞数比例.荧光定量PCR检测采用外标法,用DNA提取液提取血浆DNA后和阴、阳性对照一起加入荧光引物、Taq酶等反应液,置于荧光PCR扩增仪测定DNA含量.统计学分析:所有资料采用SPSS 10.0软件处理,a=0.05为显著性检验水准.结论:(1)ELISA法检测血清CMV IgG和IgM抗体相结合可以用于造血干细胞移植术供者的选择.IgM抗体不适用于移植术后早期诊断CMV激活感染,但可用于化疗后CMV活动性感染的诊断,还可以用于筛选阳性受者及时采取措施.(2)流式细胞仪检测CMV pp65抗原快捷、客观、易于定量,适用于造血干细胞移植术后造血恢复以后CMV感染的诊断.(3)荧光定量PCR检测血浆CMV DNA病毒方法简单快速、灵敏可靠,可以应用于造血干细胞移植术后早期诊断CMV激活感染;和流式细胞仪检测CMV pp65抗原有明显的关系.(4)造血干细胞移植术后巨细胞病毒感染与免疫抑制剂应用的种类和数量多少有明显的关系.(5)流式细胞仪检测抗原和荧光定量PCR结合可以更准确的诊断CMV早期感染,但两种方法检测活动性感染的临界值还有待进一步研究.

目录

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

展 望

小 结

参考文献

附 图

巨细胞病毒感染的早期检测与鉴定的研究进展

参考文献

缩略词表

致 谢