骨髓TPO、TGF-β及TGF-βRⅢ的改变在儿童ITP发病中的意义

摘要

目的:目前临床上将特发性血小板减少性紫癜(ITP)分为急性型(AITP)与慢性型(CITP)两型,其划分标准是病程是否超过6个月.但我们在工作中发现ITP的发病机制与临床表现相当复杂,AITP与CITP除了有病程上的差别,在发病机制上还有什么区别呢?研究证实,细胞因子和/或化学因子通过调节巨核细胞的增殖、分化与成熟参与到ITP的发病过程中,那么它们在AITP与CITP的发病中所起的作用是否相同呢?该实验的目的旨在通过研究骨髓微环境中调节巨核细胞发育的正性作用因子血小板生成素(TPO)与负性作用因子转化生长因子-β<,1>(TGF-β<,1>)及其Ⅲ型受体(TGF-β RⅢ)在儿童AITP与CITP发病中的不同改变,从而进一步揭示AITP与CITP在发病机制方面的不同.方法:(1)ITP患儿44例,其中AITP患儿28例,CITP患儿16例,均于治疗前抽取骨髓2.5ml~3ml进行检验.对照组20例为骨髓检查正常的相对健康儿童.(2)骨髓上清液的制备:取骨髓0.8ml加入装有0.2ml 1﹪EDTA抗凝剂的离心管中,混匀抗凝,2000r/min离心10分钟,收集上清液,-20℃冰箱中冻存待用.(3)骨髓TPO、TGF-β<,1>浓度的检测:以上清液为标本,用ABC-ELISA法遵照试剂盒说明书进行检测.(4)骨髓巨核细胞的分离:将1.5ml~3ml骨髓迅速注入改良PBS中,采用单克隆抗体免疫磁珠法分离出单个巨核细胞,制备成巨核细胞涂片,-20℃冰箱中干燥冻存待用.(5)巨核细胞TGF-β RⅢmRNA的检测:利用上述巨核细胞涂片,采用TSP<'ZYMED>原位杂交SABC染色系统及DAB显色,计算TGF-β RⅢmRNA的阳性率和积分值.(6)用统计学分析软件包SPSS10.0进行统计学分析,实验数据用均数±标准差(x±s)表示,采用方差分析及直线相关分析.结论:(1) AITP时血小板数量的减少多由于血小板的破坏增多引起,对骨髓TPO水平影响不大;CITP时存在巨核细胞的异常使血小板生成障碍,TPO较易受到影响;(2)骨髓TGF-β<,1>的浓度与巨核细胞上TGF-β RⅢmRNA的表达在ITP时明显提高,说明ITP时确有调节巨核细胞的负性作用因子及其相应受体的改变,两者之间的相互作用抑制了巨核细胞的正常发育,这可能就是ITP时多有巨核细胞成熟障碍使血小板生成减少的原因之一;(3)CITP与AITP相比,均存在TPO、TGF-β<,1>、TGF-β RⅢ的显著提高,原因尚不清楚,猜测可能与细胞因子和/或化学因子网络的变化、细胞免疫紊乱及不同治疗手段的影响有关;(4)TPO与TGF-β<,1>在ITP发病中的确切关系仍不清楚,有待进一步研究.(5)该实验结果为从发病机制方面区分急、慢性ITP提供一定的思路,但仍需下一步更深入的研究.

目录

前言

材料和方法

结果

附图

讨论

小结

参考文献

综述 TGF-β、TPO与巨核细胞及其相关疾病

参考文献

缩写词索引

致谢

附录