N-cadherin和γ-catenin在非小细胞肺癌中的表达及临床意义研究

摘要

肺癌为当今世界各地最常见的恶性肿瘤之一，是一种严重威胁人民健康和生命安全的疾病。半个世纪以来世界各国肺癌的发病率和死亡率均呈明显上升趋势。WHO 1997年报告：肺癌居癌症死因第一位。NSCLC发病率约占肺癌的 70％以上。NSCLC患者5年生存率平均为16％，其中局部转移的NSCLC患者5年生存率为23％，而有远处转移患者的5年生存率仅为3％。治疗失败和患者死亡的根本原因是肺癌细胞的转移。因此揭示肺癌细胞的转移机制，预测肺癌细胞的转移潜能，将会对临床医生判断患者的病情、制定合理的治疗方案及判断预后起到积极的作用，将有助于减轻患者的痛苦、延长患者的生存期、提高生活质量。 已有研究表明肺癌细胞的侵袭、转移是一个受多因素调控的、十分复杂的生物学过程。涉及肺癌细胞在原发病灶处的恶性增殖、癌细胞脱离原发病灶、在脉管内形成癌栓、在脉管内的迁移、在靶器官种植、新的转移灶形成。其关键步骤是癌细胞脱离原发病灶及黏附到靶器官。细胞黏附参与整个过程并起重要作用。介导细胞黏附的是一大类CAM和连环素(catenin)。CAM包括选择素族(selectins)、免疫球蛋白超家族(IGSF)、钙黏附素族(cadherin)等。近几年来连环素和钙黏附素族引起广大科学工作者的广泛关注，成为肿瘤转移分子机制中的研究热点。 Cadherins为依赖Ca<'2+>的CAM，是AJ的主要结构成分，是由一系列单链跨膜糖蛋白组成。在细胞黏附及分化，尤其是早期的分化中，起着非常重要的作用。目前已知有四十多种不同的Cadherin，但关于N-cadherin的研究甚少，尤其在．NSCLC方面的研究更少。国外有数篇报道，而国内仅有一篇。研究发现，N-cadherin 对于肿瘤上皮细胞、血管平滑肌细胞和外皮细胞之间的相互黏附起着重要的作用。在肿瘤形成的过程中，N-cadherin的表达有助于血管形成及上皮细胞-间质细胞的迁移，还可以通过FGF激活MAPKERK信号转导途径，诱导MMP-9基因表达，以上两个方面均有利于肿瘤血管的形成，使肿瘤易于生长和转移。 Catenins有α、β、γ及P120-catenin四种亚型。有关γ-catenin与肺癌关系的研究报道较少。如果没有γ*catenin的参与，cadherin/catenins细胞黏附复合体不能维持细胞间的正常黏附，只有当γ-catenin先从细胞黏附复合体脱离时，细胞才能浸润转移，当γ-catenin的酪氨酸残基磷酸化后将影响cadherin/catenins细胞黏附符复合体的稳定性，有可能导致细胞癌变。因此，研究γ-catenin在NSCLC细胞中的表达及其与转移的关系，对于NSCLC的诊断和治疗有重要意义。 基于目前的研究现状，本课题旨在进一步探明N-cadtlerin和γ-catenin在NSCLC中的表达及临床意义，了解他们与肺癌的发生、发展和转移的关系，从而在一定程度上探讨NSCLC的发生、发展和转移的机制，为NSCLC的诊断和治疗提供帮助。 对象与方法 一、研究对象 标本取自2002年9月至2005年10月在郑州大学第一附属医院住院手术切除的肺癌患者，共计6l例，男42例，女19例。年龄36岁～81岁，平均57.77岁。所有患者术前均未行放疗和化疗。标本均经病理证实，鳞癌36例，腺癌25例。按1997年UICC标准进行TNM分期：Ⅰ A期2例，Ⅰ B期12例，Ⅱ A期0例，Ⅱ B期7例，ⅢA期9例，ⅢB期19例，Ⅳ期12例。连续4μm厚切片。另选20例癌旁正常肺组织(均距癌组织3cm以上)作对照。 二、方法 采用S-P免疫组织化学方法，严格按照S-P试剂盒说明进行，以PBS代替一抗作为阴性对照，N-cadherin的阳性对照为已知的正常心肌组织，γ-catenin的阳性对照为已知的乳腺癌阳性组织。主要步骤如下：(1)常规脱蜡、水化，高温煮沸抗原修复；(2)过氧化物酶阻断剂阻断内源性过氧化物酶活性；(3)非免疫性动物血清阻断非特异性反应；(4)滴加即用型鼠抗人N-cadherin单克隆抗体或1：100 γ-catenin多克隆抗体；(5)加生物素标记的第二抗体；(6)滴加链亲和素-过氧化物酶制剂；(7)DAB显色后自来水充分冲洗；(8)苏木素复染，梯度酒精脱水、透明树胶封片、镜检。三、结果判定1．N-cadherin的结果判定：高倍镜(400倍)下每个视野计数100个细胞，每张切片数10个视野。参照文献的方法，将染色强度分为3级：无着色(1级)评1分，浅黄色(2级)评2分，棕黄色(3级)评3分；依据镜下阳性染色细胞数占癌细胞总数的百分率，阳性细胞数≤25％为1级(分)，26％～75％为2级(分)，≥75％为3级(分)。每张切片的最后得分为两次评分的乘积(1分～9分)，最后得分>7分为阳性表达(+)，<7分为阴性表达(-)。 2．γ-catenin的结果判定：高倍镜(400倍)下每个视野计数100个细胞，每张切片数10个视野。免疫反应染色阳性：细胞内见棕色颗粒，染色均匀，阳性细胞率≥50％。免疫反应染色阴性：所有细胞均不着色或阳性细胞率<50％。 四、统计学处理采用SPSS10.0统计学软件，用x<'2>检验及四格表资料的精确概率法进行统计学分析。P<0.05有统计学意义。 结果 一、N-cadherin及γ-catenin在NSCLC组织中的表达免疫组化染色结果显示，N-cadherin及γ-catenin的免疫组化阳性产物主要定位于细胞质，偶见定位于细胞核、膜。61例NSCLC组织中 N-cadherin表达的阳性率为37.70％(23/61)，20例正常肺组织无一例阳性表达(0％)，差异有统计学意义(P<0.01)。61例NSCLC组织中γ-catenin表达的阳性率为72.13％(44/61)，20例正常肺组织无一例阳性表达(0％)，差异有统计学意义(P<0.01)。 二、N-cadherin及γ-catenin的表达与临床病理特征的关系高、中分化NSCLC中N-cadherin阳性表达率为31.25％，低分化为61.54％，差异具有统计学意义(P<0.05)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ期NSCLC患者N-cadherin阳性表达率为57.14％，Ⅲ、Ⅳ期患者N-cadherin阳性表达率为27.5％，差异有统计学意义(P<0.05)。N-cadherin的表达与NSCLC患者的年龄、性别、肿瘤的病理类型、临床分型、大小及有无淋巴结转移、胸腔积液无关(P均>0.05)。 高分化NSCLC中γ-catenin阳性表达率为20.00％，中分化为78.95％，低分化为92.31％，差异具有统计学意义(P<0.01)。有淋巴结转移的患者中γ-catenin阳性表达率为84.21％，无淋巴结转移者为52.17％，差异具有统计学意义(P<0.05)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者γ-catenin阳性表达率分别为42.86％、57.14％、82.14％及91.67％，差异有统计学意义(P<0.05)。γ-catenin的表达与NSCLC患者的年龄、性别、肿瘤的病理类型、临床分型、大小及有无胸腔积液无关(P均>0.05)。 结论 1． N-cadherin和γ-catenin在NSCLC中的阳性表达率较高，提示其与NSCLC的发生密切相关，可能成为一个NSCLC新的诊断标志。 2． N-cadherin的表达与与NSCLC的分化程度及TNM分期密切相关，与患者的年龄、性别、肿瘤的病理类型、临床分型、大小及有无淋巴结转移、胸腔积液无关。 3．γ-catenin的表达与NSCLC患者的分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移密切相关，与患者的年龄、性别、肿瘤的病理类型、临床分型、大小及有无胸腔积液无关。 4． N-cadherin和γ-catenin的高表达可能对NSCLC患者病情的综合判断及制定合理的治疗方案提供重要依据。

目录

文摘

英文文摘

引言

对象与方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

综述 N-cadherin、γ-catenin研究进展及与非小细胞肺癌的关系

缩略词

研究生期间撰写的论文及参加的科研项目

致谢