神经节苷脂对缺氧缺血性新生大鼠认知功能改善的研究

摘要

背景和目的
　　 新生儿缺氧缺血性脑病是新生儿神经系统最常见的疾病之一。患儿可出现激惹、肌张力增高、嗜睡和抽搐等症状，严重者可致昏迷甚至死亡。即使存活下来，如不及时治疗，也会造成严重的后遗症(如生长发育落后、学习记忆能力下降和癫痫等)。其发病机制主要包括能量代谢障碍、兴奋性氨基酸过度激活、细胞内钙超载、以及细胞凋亡等。其中兴奋性氨基酸过度激活引起的神经毒性成为人们研究的热点方向。
　　 兴奋性氨基酸与其特异性受体(主要为NMDA受体)结合后，可以发挥其独特的作用。在生理状况下可以介导适度的Ca2+内流，诱导长时程增强的形成，而突触后长时程增强的形成与学习记忆能力密切相关。其过度激活后可以导致Ca2+大量内流，激活并放大由Ca2+作为第二信使的传导通路，产生一系列病理性的改变，最终可导致神经元的坏死和凋亡。NMDA受体由不同结构的亚单位组成，在海马区主要是NR1和NR2B。NR1亚单位主要介导细胞内Ca2+内流，NR2B亚单位被证实与突触后形成的长时程增强密切相关，参与学习、记忆能力的形成。
　　 缺氧缺血造成的细胞凋亡可以在发病后持续存在，是后期神经元丧失的主要原因。线粒体是调控细胞凋亡的中枢，细胞色素C从线粒体内释放后引起的凋亡是细胞内凋亡产生的主要途径。
　　 神经节苷脂作为一种营养神经类药物，现已应用于临床治疗缺氧缺血性脑病。但关于其改善缺氧缺血后认知功能障碍方面的研究很少，本课题通过建立缺氧缺血动物模型了解神经节苷脂干预下海马CA1区中NMDA受体NR1、NR2B和细胞色素C的表达变化，探讨神经节苷脂改善认知功能和保护神经的机
　　 制。
　　 材料和方法：
　　 1模型的制作和分组
　　 7日龄新生SD大鼠60只随机分为三组：A组模型组；B组神经节苷脂干预组；C组空白对照组。A组B组标号后经称量体重，置入有乙醚的烧杯中，吸入麻醉后，取仰卧位后固定于手术板上，常规消毒后，行颈前正中线切口，游离左颈总动脉，用丝线结扎，缝合切口，放回原窝中休息1小时，置于缺氧箱中，通入(8％O2+92％N2)的氮氧混合气体2小时，制成缺氧缺血大鼠模型。C组仅分离出左侧总动脉，不结扎动脉也不吸入氧氮混合气体。上述三组动物饲养方式相同。
　　 2药物应用和制作标本
　　 B组大鼠在缺氧缺血后即刻腹腔注射神经节苷脂(30mg/kg)，以后每天腹腔注射1次，持续七天；给予A组大鼠腹腔注射生理盐水(30ml/kg)，保证注射时间和注射量相同；对C组大鼠不注射任何试剂。于第八天从三组中随机选择10只新生大鼠处死，心脏灌注后快速将大脑解剖后分离，甲醛固定，常规脱水后用石蜡包埋，做连续冠状切片备检。
　　 3指标观察
　　 各组组织切片均做免疫组织化学染色观察NMDA受体NR1、NR2B及细胞色素C的表达变化，使用TUNEL法测定凋亡细胞数。剩余的大鼠于术后第28天行迷宫实验测试，观察并记录大鼠的学习及记忆能力。
　　 4统计学分析
　　 用SPSS13.0软件系统进行结果处理，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析法进行比较，以P<0.05为差异有统计学意义。馇甲
　　 结果：
　　 1学习和记忆能力比较
　　 A组大鼠第1天和第2天达标所需反应次数都明显多于C组(P<0.05)和B组(P<0.05)，正确反应率也都明显低于C组(P<0.05)和B组(P<0.05)。B组第1天和第2天达标所需反应次数仍都明显多于C组(P<0.05)，正确反应率也仍都明显低于C组(P<0.05)。
　　 2 NRI、NR2B和细胞色素C免疫组织化学的表达
　　 在光镜下NR1阳性神经元胞膜呈棕褐色，A组中NR1阳性神经元着色最深，可见部分胞核染色；C组中表达NR1阳性神经元数量最少，染色浅；B组介于二者之间。各组阳性区平均灰度值为(153.23±6.31，115.82±10.43，130.35±4.29，P<0.01)，三组间阳性区的平均灰度值均有显著性差异。
　　 NR2B表达状况B组和C组中可见到大量细胞的胞膜被染成褐色；A组神经元中染色较浅，且神经元数目较少。各组阳性区平均灰度值为(147.86±14.85，142.76±7.11，113.27±9.50)，B组和C组中的NR2B阳性区的平均灰度值明显高于A组(P<0.01)，B组和C组相比无统计学意义(P=0.148)。
　　 C组中表达细胞色素C阳性的细胞很少，A组中可见大量被染成棕色的表达细胞色素C的细胞，B组中表达阳性的细胞明显减少，阳性区平均灰度值为(113.00±7.27，152.55±7.14，127.55±5.83)，三者的表达均有显著的统计学差异(P<0.01)。
　　 3细胞凋亡
　　 C组中只有零星的凋亡细胞，A组可见大量凋亡细胞，B组中凋亡细胞较A组明显减少，三组间的凋亡细胞计数百分比有显著性差异(依次为5.12±1.32，59.23±2.73，30.15±3.26，P<0.01)。
　　 结论：
　　 1、神经节苷脂可以改善缺氧缺血性大鼠的学习记忆能力，其机制可能是通过提高NMDA受体中NR2B的表达实现。
　　 2、神经节苷脂可以减少因缺氧缺血导致的细胞凋亡，其机制可能是降低NR1和细胞色素C的表达来实现。

目录

文摘

英文文摘

引言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

附 图

参考文献

综述部分

神经节苷脂和新生儿缺氧缺血性脑病

参考文献

NMDA受体亚单位的表达调控及影响

参考文献

缩略语索引

个人简历

在学期间发表的学术论文

致谢