磷脂酶A2在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及意义

摘要

磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)是一种具有分解甘油磷脂作用的酶类,在生物界分布较广泛。根据其存在的部位以及生化功能特征的不同和氨基酸顺序的同源性,分为三种类型:1)分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2,sPLA2),其中sPLA2包括Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅸ、Ⅹ等亚型；2)胞浆型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,cPLA2)；3)Ca2+非依赖型磷脂酶A2(calcium independent PLA2,iPLA2)。研究表明,PLA2是炎症反应中的关键酶之一,它可以将磷脂水解为各种氨基醇和磷脂酸,产生以花生四烯酸(arachidonicacid,AA)为主的溶血磷脂及游离脂肪酸,进一步代谢为白三烯、前列腺素等活性物质从而参与炎症反应。PLA2在机体内可参与多种生理及病理过程,如肺泡表面活性物质代谢、磷脂重建、宿主反应、细胞信号传递及促进血液的凝固等。近年来有研究发现PLA2以及它的代谢产物除了具有炎症介质作用外,还参与调节细胞的增殖或/和生长,与恶性肿瘤关系非常密切。
　　 乳腺浸润性导管癌是最常见的严重危害健康的女性生殖系统恶性肿瘤之一,随着人们生活水平的提高及社会经济的发展,其发病率呈逐年递增的趋势,且发病年龄也渐趋于年轻化。在欧美国家及我国大部分城市中,乳腺浸润性导管癌的发病率已占女性所患恶性肿瘤的第一位。据不完全统计,全世界每年大约有120多万新发的乳腺浸润性导管癌患者,每年死于该病的女性约40万左右,严重影响妇女的身心健康,也给家庭和社会造成了相当大的危害。乳腺浸润性导管癌的发生、发展同其他常见的恶性肿瘤一样,是多个因素、多个阶段、多种因子共同参与的结果,其中癌基因的激活与抑癌基因的失活是其重要的特征之一。由于PLA2参与调节细胞的增殖或/和生长,有可能参与了乳腺浸润性导管癌的发病过程,因此,研究PLA2和乳腺浸润性导管癌的关系对深入了解该病的发病机制具有十分重要的意义。
　　 目前有关PLA2在乳腺浸润性导管癌中表达情况的研究甚少,国内目前尚未见报道,PLA2与乳腺浸润性导管癌的关系亦尚不十分明确。本研究联合应用免疫组化SP法和RT-PCR方法检测乳腺浸润性导管癌组织中sPLA2-Ⅱa和cPLA2的表达情况,并对它们与肿瘤体积、组织学分级、临床分期、淋巴结转移等临床病理因素之间的关系进行了深入分析,探讨它们在乳腺浸润性导管癌发病中的可能作用机制,以期为乳腺浸润性导管癌的诊断、治疗、临床监测、疗效判断及预后评估等提供新的理论依据。
　　 材料与方法
　　 1.应用免疫组化SP法对57例乳腺浸润性导管癌、15例乳腺纤维腺瘤及15例乳腺正常组织中sPLA2-Ⅱ a及cPLA2的蛋白表达情况进行检测分析。
　　 2.应用RT-PCR方法对57例乳腺浸润性导管癌、15例乳腺纤维腺瘤及15例乳腺正常组织中sPLA2-Ⅱ a及cPLA2 mRNA表达情况进行检测分析。
　　 统计学处理
　　 所有数据均经SPSS13.0软件进行统计分析。计数资料计算阳性率,计量资料用采用(X)±S表示；阳性率之间的比较采用x2检验(chi-square)；两组均数的比较用t检验(t-test)；两组以上均数的比较用方差分析(ANVOA)。显著性水准α=0.05。
　　 结果：
　　 1.在乳腺正常组织、乳腺纤维腺瘤组织和乳腺浸润性导管癌组织中,sPLA2-Ⅱa蛋白13.3％(2/15)、20.0％(3/15)和75.4％(43/57)；cPLA2阳性表达率分别为13.3％(2/15)、26.7％(4/15)和68.4％(39/57)；两者阳性表达率均依次升高,三者组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 2.sPLA2-Ⅱ a及cPLA2蛋白阳性表达与乳腺浸润性导管癌患者临床分期、组织学分级及有无淋巴结转移密切相关；与肿瘤体积大小无关。
　　 3.在乳腺正常组织、乳腺纤维腺瘤组织和乳腺浸润性导管癌组织中,sPLA2-Ⅱ amRNA相对含量分别为0.510±0.114、0.527±0.053和0.799±0.069;及cPLA2mRNA含量分别为0.726±0.083、0.793±0.114和0.855±0.079;两者mRNA含量均依次升高,三者组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 4.sPLA2-Ⅱ a及cPLA2 mRNA相对含量与乳腺浸润性导管癌患者临床分期、组织学分级及有无淋巴结转移密切相关；与肿瘤体积大小无关。
　　 5.sPLA2-Ⅱa及cPLA2蛋白及mRNA均呈正相关关系(P<0.05)。
　　 结论：
　　 1.sPLA2-Ⅱa和cPLA2可能均参与了乳腺浸润性导管癌的发生、发展及浸润、转移过程。
　　 2.sPLA2-Ⅱ a和cPLA2的表达呈正相关关系,提示二者在乳腺浸润性导管癌发病过程中可能起协同作用。
　　 3.sPLA2-Ⅱ a和cPLA2 mRNA表达和二者蛋白表达均呈正相关关系,提示二者mRNA表达和蛋白表达均具有一致性。

目录

文摘

英文文摘

前言

材料与方法

1.实验材料

1.1 标本来源

1.2 临床病理资料

1.3 主要仪器

1.4 主要试剂

1.5 主要试剂配制

2.实验方法

2.1 免疫组化

2.2 RT-PCR

2.3 统计学处理

结果

1 sPLA2-Ⅱa在乳腺浸润性导管癌、乳腺纤维腺瘤及乳腺正常组织中的表达

2 sPLA2-Ⅱ a表达与乳腺浸润性导管癌临床生物学行为的关系

2.1 sPLA2-Ⅱ a表达与乳腺浸润性导管癌临床分期的关系

2.2 sPLA2-Ⅱa表达与乳腺浸润性导管癌肿瘤大小的关系

2.3 sPLA2-Ⅱ a表达与乳腺浸润性导管癌组织学分级的关系

2.4 sPLA2-Ⅱ a表达与乳腺浸润性导管癌淋巴结转移的关系

3 cPLA2在乳腺浸润性导管癌、乳腺纤维腺瘤及乳腺正常组织中的表达

4 cPLA2表达与乳腺浸润性导管癌临床生物学行为的关系

4.1 cPLA2表达与乳腺浸润性导管癌临床分期的关系

4.2 cPLA2表达与乳腺浸润性导管癌肿瘤大小的关系

4.3 cPLA2表达与乳腺浸润性导管癌组织学分级的关系

4.4 cPLA2表达与乳腺浸润性导管癌淋巴结转移的关系

5 sPLA2-Ⅱ a与cPLA2蛋白表达的相关性分析

6 sPLA2-Ⅱ a在乳腺浸润性导管癌、乳腺纤维腺瘤及乳腺正常组织中mRNA的表达

7 sPLA2-Ⅱ a mRNA表达与乳腺浸润性导管癌临床生物学行为的关系

7.1 sPLA2-Ⅱa mRNA表达与乳腺浸润性导管癌临床分期的关系

7.2 sPLA2-Ⅱ a mRNA表达与乳腺浸润性导管癌肿瘤大小的关系

7.3 sPLA2-Ⅱa mRNA表达与乳腺浸润性导管癌组织学分级的关系

7.4 sPLA2-Ⅱ a mRNA表达与乳腺浸润性导管癌淋巴结转移的关系

8 cPLA2在乳腺浸润性导管癌、乳腺纤维腺瘤及乳腺正常组织中mRNA的表达

9 cPLA2 mRNA表达与乳腺浸润性导管癌临床生物学行为的关系

9.1 cPLA2 mRNA表达与乳腺浸润性导管癌临床分期的关系

9.2 cPLA2 mRNA表达与乳腺浸润性导管癌肿瘤大小的关系

9.3 cPLA2 mRNA表达与乳腺浸润性导管癌组织学分级的关系

9.4 cPLA2 mRNA表达与乳腺浸润性导管癌淋巴结转移的关系

讨论

1.磷脂酶A2的生物学特性及功能

2.sPLA2-Ⅱa和cPLA2在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义

3.sPLA2-Ⅱ a和cPLA2与恶性肿瘤的关系

结论

参考文献

综述sPLA2-Ⅱ a在肿瘤中的研究进展

参考文献

英文缩略词及中英文对照索引

致谢

攻读硕士期间发表的论文