氯化汞对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白和抑制素表达的影响

摘要

研究显示，近半个世纪来人类的生育能力有明显的下降，不孕不育症尤其是男性不育症的人数有逐年增加的趋势，已成为一个影响人类健康和发展的医学和社会问题。环境污染问题已经成为其中的重要影响因素。汞及其化合物被广泛地应用于化学工业，军工生产、医药及农业生产等方面，其环境污染和生殖危害已经受到广泛关注。研究资料显示睾丸是外源性化学物质生殖毒性的重要靶器官，而汞能透过血-睾屏障在睾丸组织中蓄积，引起睾丸萎缩，精子的数量、质量下降，最终诱发雄性生殖障碍，但是其作用的途径和机制还不清楚。相关研究提示这些损害可能是首先通过影响睾丸支持细胞(Sertoli cell，SC)的功能、结构和数量而引起的。Sertoli的重要功能和原代培养模型的众多优点，使被其广泛用于外源性化合物的生殖毒性研究中。目的
　　 该研究以原代培养的大鼠Sertoli细胞为模型，从基因和蛋白水平观察氯化汞对Sertoli细胞雄激素结合蛋白（androgen binding protein, ABP）和抑制素（inhibin，INH）表达的影响，为进一步研究无机汞的雄性生殖毒性研究提供理论依据。方法
　　 1细胞培养：取18～20日龄清洁级雄性SD大鼠，用胰蛋白酶-胶原酶消化法分离Sertoli细胞，37℃、5％CO2条件下培养，48小时后用Tris-HCl液纯化细胞。
　　 2MTT法测定细胞活性：将Sertoli细胞以(2～4)×105个/ml接种到96孔板，分别加入含0、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L浓度的氯化汞工作液，每个浓度设6个复孔，染毒24小时后用酶标仪测各孔OD值，确定染毒浓度。
　　 3实时定量RT-PCR法检测ABP和IHNmRNA的表达：将浓度分别为0、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L的氯化汞工作液加入培养的Sertol细胞内，染毒24h后提取RNA，检测各染毒组ABP和IHNmRNA的转录水平。
　　 4免疫酶联吸附法(ELISA)测定ABP和INH蛋白表达：分别取加0、10-8、10-7、106、10-5mol/L氯化汞工作液染毒24小时后的细胞培养液上清，在酶标仪上于450nm波长下测定各孔OD值，测定各染毒组ABP和IHN蛋白的表达量。结果
　　 1细胞培养结果：细胞存活率在95％以上，24小时开始贴壁生长，48小时以后开始铺开生长，经Tris-HCl低渗液纯化后Sertoli细胞纯度在90％以上，细胞生长良好。
　　 2细胞活性测定结果：各浓度组的氯化汞工作液染毒Sertoli细胞24h后的OD值结果显示，10-4mol/LHgCl2能明显影响细胞的存活率，与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）；其它处理组对Sertoli细胞活性没有明显影响，与对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05）。
　　 3ABP和INHmRNA表达测定结果：ABPmRNA在10-7和10-6mol/L染毒组的相对表达量与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。IHNmRNA相对表达量在10-7、10-6和10-5mol/L染毒组与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　 4ABP和INH蛋白表达测定结果：ABP蛋白表达量在10-6mol/L染毒组与对照组差异有统计学差异(P＜0.05)。INH蛋白分泌量在10-7、106和10-5mol/L染毒组与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论
　　 氯化汞能影响Sertoli细胞的分泌功能，可以促进ABPmRNA和蛋白的表达，而抑制INHmRNA和蛋白的表达。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略词表

图和附表清单

1 引言

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 Sertoli细胞的分离培养和鉴定

3.2 Sertoli细胞生长曲线

3.3 氯化汞对Sertoli细胞活性的影响

3.4 氯化汞对Sertoli细胞ABP和INHmRNA转录水平的影响

3.5 氯化汞对Sertoli细胞ABP和INH表达的影响

4 讨论

5 结论

参考文献

综述 睾丸Sertoli细胞的分泌功能和调控的研究进展

参考文献

个人简历 在校期间发表的论文与研究成果

致谢