枯草杆菌Eng酶大肠杆菌周质高效表达的机制研究

摘要

来源于枯草芽孢杆菌I15的内切1-4-葡聚糖酶,当在大肠杆菌中表达时,可高效分泌表达于大肠杆菌周质中,最适条件下表达量可达7.1g/L。于是利用信息学软件分析了Eng酶的信号肽,属于Ⅱ类SecB依赖型,因此,SecB分子伴侣蛋白应该和Eng酶的前体结合。随后,通过Pull-down实验,证明了SecB与Eng酶前体结合。同时,通过转化Ⅱ类TAT途径蛋白缺陷型突变体,发现外分泌量减少,因此判断Eng酶不仅利用SecB途径,还利用TAT途径。讲克隆得到的蛋白酶基因连接此信号肽,同样实现了高效周质表达。