噬菌体展示青霉素G酰化酶大肠杆菌-枯草杆菌通用表达载体的构建

摘要

革兰氏阴性菌Alcaligenes faecalis的PGA已在噬菌体表面获得展示,并证实有活力,革兰氏阳性菌来源的PGA是否能在噬菌体表面成功展示,迄今尚未见报道.将包含信号肽和琥珀终止密码子UAG(Amber)的完整巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶基因克隆到噬菌粒pSurfscript,通过引入的11肽连接青霉素G酰化酶的C末端与噬菌体外壳蛋白gp3的N末端.以构建的噬菌粒pSurfpga转化具有琥珀突变的大肠杆菌XL1-blue,以辅助噬菌体M13K07超感染,进行青霉素G酰化酶基因的表达和在噬菌体表面的展示.用NIPAB法测得平均活力为2.5×10<'-12>mU/cfu.这是首次在噬菌体表面展示出有活力的巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶,为利用噬菌体展示技术进行青霉素G酰化酶突变库的筛选奠定了基础.

目录

第一章巨大芽孢菌青毒素G酰化酶的噬菌体展示

引言

Ⅰ材料与方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1PGA基因和g3序列通过linker的连接(Fig2)

2.2噬菌粒psurfpga的构建和鉴定

2.4酶活测定

3讨论

参考文献

第二章大肠杆菌-枯草杆菌通用表达载体的构建

引言

Ⅰ材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1质粒pzfpganoti的构建和鉴定

2.2pzcp980的鉴定

2.3pzcp9801的鉴定

3 讨论

参考文献

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