肝枯否细胞铁蓄积对CCl4致小鼠急性肝损伤的影响及机制

摘要

铁蓄积会导致或加重肝损伤,同时肝损伤多伴随着铁蓄积现象的存在,研究发现,肝枯否细胞在铁蓄积与肝损伤的关系中起着重要作用,但是其详细作用机制还不甚清楚,有待进一步研究。
　　 目的：通过对正常小鼠和肝枯否细胞铁蓄积小鼠建立CCl4急性肝损伤模型,了解肝枯否细胞铁蓄积是否会加重肝损伤及其机制,为进一步揭示铁蓄积影响肝损伤的详细机制提供参考。
　　 材料与方法：对引进小鼠饲养和配种,基因型鉴定的方法得到雄性FPN-/-(正常小鼠)和FPN=/=cre(肝枯否细胞铁蓄积小鼠)小鼠各16只。将其各分为对照组和实验组,每组8只,两对照组腹腔注射橄榄油,两实验组腹腔注射四氯化碳。24h后取血测定血清丙氨酸转移酶(Alanine transaminase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Transaminase,AST)水平。处死小鼠,称取肝重,计算肝脏指数。制备10％肝匀浆,测定肝组织中丙二醛(Malonaldehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量。做石蜡切片HE染色和TUNEL染色,观察肝脏损伤程度和肝细胞凋亡情况。提取组织mRNA和蛋白,运用Real-time RT-PCR检测肝组织中TNF-α、IL-6、TGF-β、Caspase-2、Caspase-8的mRNA表达水平,运用Western Blot检测肝组织中P38、JNKs蛋白磷酸化水平、Caspasc-2、Caspase-8的蛋白表达水平。
　　 用SPSS12.0软件进行数据分析,所有数据均以(-x±S)表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用S-N-K检验。以a=0.05为检验水准。
　　 结果：
　　 1.肝损伤指标情况、肝脏病理学情况两实验组肝脏指数、ALT、AST、MDA均显著高于其对照组(P＜0.05),SOD、GSH均显著低于其对照组(P＜0.05)。两对照组肝脏指数、ALT、AST、MDA、SOD、GSH的差异无统计学意义(P＞0.05)。FPN-/-cre实验组肝脏指数、ALT、AST、MDA均显著高于FPN-/-实验组(P＜0.05),SOD、GSH均低于FPN-/-实验组,差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 两对照组肝细胞结构正常,两实验组肝细胞结构破裂、排列紊乱,FPN-/-Acre实验组比FPN-/-实验组更严重。
　　 2.相关基因mRNA和蛋白表达水平、肝细胞凋亡情况两实验组TNF-a、IL-6、TGF-β、Caspase-2、Caspase-8的mRNA水平均显著高于其对照组(P＜0.05)。两对照组TNF-a、IL-6、TGF-β、Caspase-2、Caspase-8的mRNA水平差异无统计学意义(P＞0.05)。FPN4-/-cre实验组TNF-a、IL-6、Caspase-2的mRNA水平均显著高于FPN-/-实验组(P＜0.05),TGF-β、CaSpase-8的mRNA水平均高于FPN-/-实验组,差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 两实验组JNKs蛋白磷酸化水平、Caspase-2、Caspase-8蛋白水平均高于其对照组,差异无统计学意义(P＞0.05),P38蛋白磷酸化水平均显著低于其对照组(P＜0.05)。两对照组JNKs、P38蛋白磷酸化水平、Caspase-2、Caspase-8蛋白水平的差异无统计学意义(P＞0.05)。FPN-/-cre实验组JNKs蛋白磷酸化水平、Caspase-2、Caspase-8蛋白水平均显著高于FPN-/-实验组(P＜0.05),P38蛋白磷酸化水平显著低于FPN-/-实验组(P＜0.05)。
　　 与对照组相比,两实验组均出现了肝细胞凋亡现象,FPN-/-cre实验组比FPN-/-实验组更严重。
　　 结论：
　　 1.肝枯否细胞铁蓄积会加重CCl4所致的急性肝损伤。
　　 2.肝枯否细胞铁蓄积加重肝损伤可能与铁蓄积刺激肝枯否细胞炎症因子分泌水平上调,直接刺激或者通过改变P38、JNKs通路活性,促进细胞凋亡因子分泌,加快肝细胞凋亡有关。