Tristetraprolin和VEGF家族的表达异常参与腹膜透析大鼠超滤衰竭的发生

摘要

背景与目的：
　　 腹膜透析(PD)是终末期肾病(ESRD)患者长期生存的一种有效的肾脏替代治疗方法。但是随着透析病人腹膜腔长时间接触非生物相容性透析液，腹膜超滤能力将逐渐下降，最终导致超滤衰竭(UFF)的发生。血管内皮生长因子(VEGF)促使血管新生，使腹膜物质转运面积系数(MTAC)增大，从而导致UFF，这是近年来的研究热点。同样淋巴重吸收增加也是UFF的发生机制之一，VEGF家族中VEGF-C/VEGF-D能够促淋巴管形成，但关于PD腹膜中淋巴管新生导致淋巴重吸收增加研究相对较少。Tristetraprolin（TTP,又称锌指蛋白-36）作为炎性调节因子，在胃肠癌、乳腺癌中发现可以调节VEGF的表达，而在PD腹膜中TTP是否也参与调控VEGF家族的异常表达，这也未见有研究报道。因此，本实验采用5/6肾脏切除法制作大鼠尿毒症模型，并在此基础上构建腹透模型，以此模拟人体尿毒症环境及腹腔内长期PD环境，来研究TTP与VEGF家族的表达情况及淋巴管新生是否和血管新生一样参与了UFF的发生。
　　 方法：
　　 1.选取清洁级健康SD大鼠40只(180～200g)，5/6大鼠肾脏切除构建尿毒症模型，并在此基础上建立腹膜透析大鼠模型。
　　 2.实验组别分为:正常组（n=8只），假手术组（n=8只），尿毒症组(n=8只)，PD2周组（n=8只），PD4周组（n=8只）。假手术组行双侧肾包膜剔除术;PD组按照按3ml/100gBW从大鼠颈部腹透管注入4.25％腹透液，规律腹膜透析2周或4周。
　　 3.正常组、PD2周组、PD4周组SD大鼠于处死前，行腹膜平衡实验(PET)，计算葡萄糖转运量和超滤量。
　　 4.各组SD大鼠处死后取其大网膜和腹膜，大网膜行免疫组化观察腹膜中VEGF、VEGF-C表达变化，CD31、LYVE-1分别标记观察腹膜组织新生血管密度(MVD)和淋巴管密度(LVD);
　　 5.腹膜组织提取总RNA逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测腹膜中VEGF、VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、TTP表达水平变化。腹膜组织提取蛋白行Westernblot检测各组TTP蛋白的表达变化。
　　 结果：
　　 1.PET结果显示:与正常组相比，PD2周组和PD4周组葡萄糖转运量均增加(P＜0.05)，且PD4周组较PD2周组增加更明显(P＜0.05)。与正常组相比，PD2周组和PD4周组超滤量均减少(P＜0.05)，且PD4周组较PD2周组减少更明显(P＜0.05)。
　　 2.与正常组相比，尿毒症组和PD4周组大鼠腹膜的CD31、LYVE-1蛋白表达均增加(P＜0.05)，且与尿毒症组相比，PD4周组CD31、LYVE-1蛋白表达增加(P＜0.05)。计算MVD和LVD，与正常组相比，尿毒症组和PD4周组大鼠腹膜的MVD和LVD均增加(P＜0.05)，且与尿毒症组相比，PD4周组大鼠腹膜的MVD和口LVD均增加（P＜0.05）。
　　 3.与正常组相比，尿毒症组大鼠VEGF、VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-DmRNA表达均明显增加(P＜0.05)，且PD4周组大鼠的表达量较尿毒症组亦明显上升(P＜0.05)。
　　 4.与正常组相比，尿毒症大鼠TTP蛋白表达减少(P＜0.05)，而与尿毒症组比较，PD4周组大鼠TTP蛋白表达明显减少(P＜0.05).
　　 4.与正常组比较，2周PD组VEGF、VEGF-CmRNA和VEGF、VEGF-C蛋白表达增加(P＜0.05)，4周PD组较2周PD组表达亦增加(P＜0.05)。而与正常组比较，2周PD组TTP蛋白表达减少(P＜0.05)，4周PD组较2周PD组表达办减少(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1.在机体内尿毒症和高糖腹透液环境下TTP表达异常，使其对VEGF家族表达失调控，且具有腹透时间依赖性，进而促进超滤衰竭的发生。
　　 2.高糖腹透液导致血管和淋巴管的新生，均参与超滤衰竭的发生。

目录

声明

摘要

中英文缩略词对照表

1 前言

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

2．3 免疫组化检测大鼠腹膜组织VEGF、VEGF-C、LYVE-1和CD31蛋白的表达

2．4 RT-PCR法检测大鼠腹膜组织中VEGF家族、TTP和TNF-α mRNA水平的表达

2．5 Western-blot检测大鼠腹膜组织中TTP蛋白水平的表达

2．6 统计学方法

3 结果

3．1 尿毒症腹膜透析大鼠模型制作结果

3．2 腹透液对PD大鼠腹膜结构和功能的影响

3．3 腹透液对大鼠腹膜VEGF家族mRNA表达水平的影响

3．4 腹透液对腹膜TTP mRNA与蛋白的影响

3．5 腹透时间对腹膜VEGF、VEGF-C蛋白及mRNA的影响的影响

3．5 腹透时间对腹膜TTP mRNA与蛋白的影响

4 讨论

5 结论

参考文献

综述

个人简介和在读期间发表论文情况

致谢