小儿肾母细胞瘤中P73和SIX2基因的表达及甲基化相关性研究

摘要

目的：
　　 探讨小儿肾母细胞瘤组织及血液中P73和SIX2基因的转录表达及其启动子甲基化状态，并观察其与临床病理学特征的关系，以期从表观遗传学角度探讨肾母细胞瘤的发生机制，为其未来基因靶向治疗提供理论依据。
　　 方法：
　　 运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和甲基化特异性PCR(MSP)法检测组织及血液中P73和SIX2基因转录表达水平及其启动子甲基化状态，并分析小儿肾母细胞瘤中两者与临床病理特征的关系及基因的甲基化对其转录表达的影响。
　　 结果：
　　 1.组织及外周血中提取RNA的鉴定组织及外周血中提取RNA，电泳图显示28S条带亮度约为18S的两倍，说明RNA完整性较好;测定其A260/A280值大于1.90，说明RNA纯度较高。
　　 2.组织及外周血中P73和SIX2基因mRNA相对表达量(RQ)RQ值均以一选定正常小儿外周血为对照。瘤与瘤旁组织中P73、SIX2mRNA的相对表达量(RQ)均大于正常肾组织(p＜0.05)，而瘤和瘤旁组织之间无差异(P＞0.05);同时检测3例胎儿肾平均SIX2mRNARQ值为330.55±18.97。病例组中P73、SIX2mRNA的相对表达量(RQ)均高于对照组(P＜0.05)。
　　 3.组织及血液中中P73和SIX2基因启动子甲基化状态瘤与瘤旁组织中P73、SIX2基因甲基化阳性率均低于正常肾组织(P＜0.05)，而瘤和瘤旁组织之间无差异(P＞0.05);病例组中P73、SIX2基因甲基化阳性率显著低于对照组(P均＜0.05);3例胎儿肾均为非甲基化。
　　 4.瘤组织及病例组中P73和SIX2mRNA相对表达量(RQ)、甲基化状态与临床资料的关系瘤组织中P73mRNA的RQ值在以肿瘤大小、临床分期、病理分型、有无淋巴转移分组之间比较，差异均有统计学意义(P＜0.05);瘤组织中SIX2mRNA的RQ值在以肿瘤大小、临床分期、病理分型、有无淋巴转移、有无血管浸润分组之间比较，差异均有统计学意义(P＜0.05);病例组中P73、SIX2mRNA的RQ值在以肿瘤大小、临床分期、病理分型、有无淋巴转移、治疗转归分组之间比较，差异均有统计学意义(P＜0.05);瘤组织及病例组中不同临床资料分组之间P73、SIX2甲基化阳性率比较均无统计学意义(P＞0.05)。
　　 5.组织及血液中P73、SIX2基因甲基化状态与其mRNA相对表达量(RQ)的关系甲基化组中瘤组织P73、SIX2的RQ值均高于正常肾组织(P＜0.05)，非甲基化组中三者之间的RQ值比较无统计学差异(P＜0.05);甲基化组中瘤血P73、SIX2的RQ值均高于正常对照血(P＜0.05)，非甲基化组中两者之间的RQ值比较无统计学差异(P＞0.05)。
　　 6.组织及血液中P73、SIX2mRNA相对表达量(RQ)与患儿生存的关系将38例瘤组织及45例病例组患儿的生存资料整理后，以P73、SIX2mRNA相对表达量(RQ)值的平均值为界，RQ值≥平均值患儿的中位生存时间均显著低于＜平均值者(P＜0.05)。
　　 7.组织及血液中p73、SIX2基因RQ值、甲基化状态的相关关系经Pearson和Sperman等级相关分析发现:瘤组织中p73和SIX2基因RQ值无相关关系（γs=0.252，P=0.128），而病例组中两者之间有正相关关系(γ=0.785，P=0.000);瘤组织、病例组中p73和SIX2基因甲基化状态均有正相关关系(γ=0.558，P=0.000;γ=0.539,P=0.000)。
　　 结论：
　　 1.P73、SIX2基因在肾母细胞瘤组织及血液中高表达，并与肿瘤恶性程度呈正相关;
　　 2.P73、SIX2基因甲基化状态与转录水平的高表达有负相关倾向;
　　 3.P73、SIX2基因的高表达与患儿的低生存率密切相关。

目录

声明

摘要

中英文缩略词

引言

第一部分：小儿肾母细胞瘤中P73基因的表达及甲基化

1 材料与方法

1．1 研究对象及分组

1．2 标本采集

1．3 外周血淋巴细胞分离

1．4 肾母细胞瘤组织及血液中P73基因的表达

1．5 肾母细胞瘤组织及血液中P73基因启动子的甲基化状态

1．6 统计学分析

2 结果

2．1 不同组织及血液中P73基因mRNA相对表达量(RQ)

2．2 不同组织及血液中P73基因启动子甲基化状态

2．3 P73基因甲基化状态与mRNA相对表达量(RQ)的关系

2．4 P73mRNA相对表达量(RQ)与患儿生存的关系

3 讨论

第二部分：小儿肾母细胞瘤中SIX2基因的表达及甲基化

1 材料与方法

1．1 研究对象及分组

1．2 标本采集

1．3 外周血淋巴细胞分离

1．4 肾母细胞瘤组织及外周血中SIX2基因的表达

1．5 肾母细胞瘤组织及血液中SIX2基因启动子的甲基化状态

1．6 统计学分析

2 结果

2．1 不同组织及血液中SIX2基因mRNA相对表达量(RQ)

2．2 不同组织及血液中SIX2基因启动子甲基化状态

2．3 SIX2基因甲基化状态与根mRNA相对表达量(RQ)的关系

2．4 SIX2mRNA相对表达量(RQ)与患儿生存的关系

3 讨论

结论

附图

参考文献

综述

个人简历

致谢