大鼠肝门阻断过程中扪摸对肝脏热缺血再灌注损伤的影响及机制研究

摘要

目的：
　　 探讨在肝脏外科手术过程当中，手术操作本身即扪摸对大鼠在体肝脏热缺血再灌注损伤的影响及意义;探讨扪摸影响肝脏热缺血再灌注损伤可能的机制。
　　 方法：
　　 1.模型制作:
　　 将30只清洁级(SPF)雄性SD大鼠(Sprague-Dawleyrat)随机分成三组:假手术组（Sham组）、肝脏缺血再灌注组（IR组）、扪摸组（MN组），每组10只。Sham组仅行剖腹、肝镰状韧带游离、肝十二指肠韧带暴露，不行任何其他手法操作;IR组开腹后充分暴露肝门，解剖并分离供应肝中叶和右叶的动脉、静脉和胆管，并使用无创动脉夹阻断15min，再灌注2h;MN组操作同IR组，且在肝门阻断过程中对大鼠肝脏右叶进行轻柔挤压及摩擦2min×5次，每次手法操作间隔1min，操作力度相同、适中，避免对肝叶造成机械性损伤。
　　 2.观测指标:
　　 血清转氨酶水平改变:各组大白鼠在再灌注2h后分别取门静脉血进行血清转氨酶ALT及AST定量检测（u/l）。
　　 肝组织病理学检查:取肝组织行H-E染色观察肝组织损伤情况并行损伤分级评分，评分标准:0分:静脉血管及肝小叶内无炎性细胞浸润及肝细胞变性、坏死;1分:汇管区少量炎细胞浸润，肝细胞少量变性及坏死;2分:肝小叶内散在肝细胞变性及灶状坏死，肝组织内较多炎性细胞浸润，肝小叶结构尚完整;3分:肝窦、肝中央静脉内淤血，广泛肝细胞变性、坏死，肝组织大量炎性细胞浸润，部分肝小叶破坏。每个标本随机取5个视野损伤评分平均值作为每个标本评分值。
　　 肝组织肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)和P-选择素(P-selectin)表达水平测定:使用免疫组化法（Sp法）测量肝组织TNF-α和P-选择素表达水平，结果用平均阳性灰度值表达。
　　 所有定量资料以均数±标准差（(x)±s）表示，统计学分析采用单因素方差分析LSD法。SPSS17.0统计软件进行统计处理，P＜0.05为有统计学意义。
　　 结果：
　　 1.血清肝脏转氨酶水平测定结果:
　　 IR组血清ALT水平（251.87±50.80U/L）和MN组血清ALT水平（366.75±89.45U/L）较Sham组（57.25±16.05U/L）明显升高(P=0.000＜0.05，F=54.19)，其中MN组较IR组ALT水平明显增高(P=0.000＜0.05);IR组血清AST水平（226.75±19.12U/L）和MN组血清AST水平（792.25±87.71U/L）较Sham组（76.50±12.38U/L）明显升高(P=0.000＜0.05，F=416.21);上述测量指标MN组较IR组均明显增高(P=0.000＜0.05)。
　　 2.光镜下肝组织病理改变及损伤评分结果:
　　 Sham组肝组织光镜下观察可见肝小叶、肝窦及肝细胞索结构均正常，未见有明显的肝细胞变性及坏死，汇管区内未见有明显炎症细胞浸润;IR组肝组织光镜下可见汇管区及肝窦内有少量炎症细胞浸润，部分肝细胞索结构破坏，肝小叶内散在肝细胞变性及坏死，肝小叶结构尚正常;MN组观察见肝组织内肝窦及汇管区严重瘀血，同时有大量的炎性细胞浸润，肝细胞索结构紊乱，肝小叶内可见大量肝细胞变性及肝细胞坏死。评分结果:IR组肝组织病理评分（0.93±0.13）和MN组肝组织病例评分（2.10±0.15）分别比Sham组（0.15±0.12）高(P=0.001＜0.05)，而MN组较IR组肝组织病理评分明显增高(P=0.000＜0.05)。
　　 3.肝组织TNF-α和P-选择素表达情况:
　　 TNF-α和P-选择素在三组中的表达有明显的统计学差异(P＜0.05):其中IR组肝组织TNF-α表达的平均阳性灰度值水平（132.08±4.84）和MN组TNF-α平均阳性灰度值（150.50±12.11）较Sham组（85.52±6.31）明显升高(P=0.000＜0.05，F=128.19);IR组肝组织P-选择素表达的平均阳性灰度值水平（142.14±3.60）和MN组P-选择素平均阳性灰度值（151.91±2.36）较Sham组（91.05±2.66）明显升高(P=0.000＜0.05，F=1000.39)，上述两指标在MN组中表达水平较IR组均明显增高，差异有统计学意义(p=0.000＜0.05)。
　　 结论：
　　 1.扪摸可加重大鼠在体肝脏热缺血再灌注损伤，因此在肝脏外科手术操作过程当中应尽量减少对其进行扪摸。
　　 2.扪摸加重肝脏热缺血再灌注损伤的机制可能由于扪摸引起肝组织中TNF-α和P-选择素表达的上调所致。

目录

声明

摘要

中英文缩略词

引言

材料与方法

1．1 材料

1．2 大鼠部分肝脏缺血再灌注模型制备

1．3 标本的制备

1．4 指标测定及方法

1．5 统计学分析

结果

2．1 血浆ALT、AST水平

2．2 光镜下肝组织病理改变及评分

2．3 肝组织TNF-α和P-选择素表达情况

讨论

3．1 扪摸在肝移植过程中对肝脏缺血再灌注损伤的影响

3．2 肿瘤坏死因子-α

3．3 P-选择素

结论

参考文献

综述

个人简历、在学期间发表的学术论文

致谢