沙颍河区域铅、镉污染及p53基因多态性对居民血清相关因子水平的影响

摘要

目的:
　　 对沙颍河沿岸居民血清中生长因子、多种重金属元素、相关金属蛋白和全血p53基因多态性进行测定和分析，以了解沙颖河水体重金属铅、镉污染和p53基因多态性所致相关血清学指标的改变，用于探索沙颍河区域重金属铅、镉污染对居民健康状况的影响。
　　 材料与方法:
　　 1.选择距沙颖河河床5km以内和20km以外的两个村庄作为污染区和对照区，分别在枯水期和丰水期采集河水、河水底泥及两区饮用水、土壤、粮食和蔬菜样品。用火焰原子吸收分光光度法测量外环境样品中铅、镉的含量，根据结果评价沙颖河中铅、镉污染程度，并比较分析污染区和对照区各环境介质中铅、镉的含量。
　　 2.以两村30～70岁的在当地居住5年以上村民作为调查对象，按照有无肿瘤患病史和男女性别比约1∶2的标准，共计选入796名村民作为研究对象，其中污染区有394名，对照区有402名。由统一经过培训的调查人员对村民进行一对一访问式问卷调查，并由实验室人员抽取清晨空腹静脉血10ml，分离备用。
　　 3.用酶联免疫吸附法(Elisa)测定居民血清中两种生长因子(VEGF和TGF-β1)和金属蛋白（MT和MMP-9）的水平，用溶出伏安法测定血清中的重金属元素铅、镉、锌、铜的水平，根据测定结果对沙颍河流域人群重金属暴露程度进行评价，并比较两区人群中相应生长因子和金属蛋白的含量。
　　 4.用限制性内切酶片段多态性检测两区人群p53基因的多态性，分析不同基因型对人群各指标的影响。
　　 5统计学处理。采用Epidata3.0对调查问卷资料进行双人录入，运用统计软件SPSS12.0进行所有的数据分析。所有数据的正态性检验采用K-S检验方法，方差齐性检验采用Levenetest检验方法。根据资料分布特征分别采用方差分析、两独立样本t检验、x2检验、Pearson相关分析等对数据进行统计分析（检验水准α=0.05）。
　　 结果:
　　 1.3个断面丰水期和枯水期河水水样中铅含量均超过Ⅳ类地表水标准，镉含量均超过Ⅴ类地表水标准(GB3838-2002)，且丰水期和枯水期中3断面铅、镉浓度差异均无统计学意义(P＞0.05)，3个断面底泥中铅、镉含量也均无统计学意义（P＞0.05）。污染区饮水、土壤、粮食、蔬菜中的铅、镉含量均高于对照区(P＜0.05)。
　　 2.污染区人群的血清铅、镉及铜锌比值水平均高于对照区，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 3.污染区人群血清MT、VEGF、TGF-β1、MMP-9的含量均高于对照区人群(P＜0.05)。血清MT、VEGF、TGF-β1、MT、MMP-9含量随着血清铅、镉含量的增加而增加。
　　 4.两区人群p53基因多态性分布差异无统计学意义(P＞0.05)。Pro/Pro基因型的血清铅、镉含量、铜锌比值、MT、VEGF含量高于其余两种基因型组，Arg/Pro基因型的血清TGF-β1、MMF-9含量高于其余两种基因型组。高血铅组中Pro/Pro基因型的VEGF水平为最高，Arg/Pro基因型的MMP-9水平为最高(P＜0.05);低血铅组中Pro/Pro基因型的TGF-β1、MT水平为最高，Arg/Pro基因型的血清VEGF、MMP-9水平为最高(P＜0.05);高血镉组中Pro/Pro基因型的MT水平为最高;低血镉组中Pro/Pro基因型的血清VEGF水平为最高，Arg/Pro基因型的血清MMP-9水平为最高（P＜0.05）。
　　 结论:
　　 1.沙颖河水体中铅、镉污染严重，导致周边外环境介质中铅、镉含量超标，并已进入人体内，使成人体内血铅、血镉浓度升高。
　　 2.外环境铅、镉高暴露与p53基因多态性的共同作用，使污染区人群血清中VEGF、TGF-β1、MT、MMF-9的水平升高。

目录

声明

摘要

图和附表清单

英文缩略词对照表

1 引言

2 材料与方法

2．1 调查区域的确定及调查对象的选择

2．1．1 调查区域的确定

2．1．2 调查对象的选择

2．2 资料收集

2．2．1 问卷调查

2．2．2 医学体检

2．2．3 现场样本的采集、分装与储运

2．3 实验室指标的测定

2．3．1 主要试剂

2．3．2 主要仪器及设备

2．3．3 实验方法

2．4 质量控制

2．5 数据分析

3 结果

3．1 外环境铅、镉的检测结果

3．2 沙颍河S县两区居民问卷调查和体检结果比较

3．3 沙颍河S县段面两区居民血清铅、镉、锌、铜的测定

3．4 沙颍河S县段面两区居民血清MT水平结果

3．4．1 不同血铅、血镉组人群血清MT浓度的比较

3．4．2 两区人群血清中铅、镉、锌、铜与MT含量的相关性分析

3．5 两区居民血清生长因子和基质金属蛋白酶9水平结果

3．6 沙颍河S县段面污染区与对照区居民p53基因多态性检测结果

3．6．1 基因组DNA提取结果完整性的检测

3．6．2 p53基因目的片段的PCR扩增效果检测

3．6．3 p53基因目的片段的酶切结果

3．6．4 p53基因型分布Hardy-Weinberg平衡检测

3．6．5 两区p53基因第72位密码子基因频率和基因型分布的比较

3．6．6 p53不同基因型的血清铅、镉、锌、铜及铜锌比值的比较

3．6．7 p53不同基因型的血清VEGF、TGF-β1、MT、MMP-9的比较

3．6．8 p53同种基因型不同血铅组、血镉组血清相关因子水平的比较

4 讨论

4．1 调查问卷结果分析

4．2 沙颍河S县段水体重金属铅、镉污染现状及其进入人体的主要途径

4．3 两区人群血清铅、镉、铜、锌的分析

4．4 铅、镉暴露对两区居民血清金属蛋白和各种生长因子水平的影响

4．4．1 铅、镉暴露与金属硫蛋白水平的分析

4．4．2 铅、镉暴露与居民血清生长因子和MMP-9水平的分析

4．5 两区人群p53基因多态性的分析

4．5．1 p53基因多态性与肿瘤的遗传易感性

4．5．2 p53基因多态性在两区人群的分布

4．6 p53不同基因型相关血清学指标的分析

5 结论

参考文献

综述

附表

个人简历

致谢