大豆黄酮、Mung、Gin和L08对人肝癌细胞的抑制作用

摘要

目的：
　　肝癌(Liver cancer)是指发生在肝脏的恶性肿瘤，包括原发性肝癌与转移性肝癌，其发病率与死亡率较高，严重威胁着人类的生命健康。治疗肝癌的传统方法也是主要的治疗方法就是手术切除、放射治疗、化学抗肿瘤药物治疗。然而传统的治疗方法效果并不理想，肝癌的复发和转移难以控制。近年来，人们对天然植物的抗肿瘤作用的研究越来越多。本实验从大豆、绿豆和生姜中分别提取分离出大豆黄酮、Mung、Gin和L08，用这四种药物处理体外培养的肝癌细胞SMMC-7721，来研究它们对肝癌细胞SMMC-7721的增殖及对肝癌干细胞CD44表达水平的影响，从而希望为肝癌的防治提供新的实验依据。
　　方法：
　　1.培养人肝癌细胞SMMC-7721，获得对数生长期细胞。
　　2.配制100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml和500μg/ml浓度的大豆黄酮、Mung、Gin和L08，分别处理对数生长期的人肝癌细胞SMMC-7721，处理24小时、48小时和72小时，然后用MTT法测定细胞的增殖率并绘制细胞生长曲线。
　　3.配制100μg/ml、300μg/ml、和500μg/ml的大豆黄酮、Mung、Gin和L08分别处理人肝癌细胞SMMC-7721，处理时间为24h。将荧光素FITC标记的抗体与处理过的细胞混合通过流式细胞仪检测细胞表面抗原CD44。
　　4.配制100μg/ml、300μg/ml、和500μg/ml的大豆黄酮、Mung、Gin和L08分别处理人肝癌细胞SMMC-7721，并用WesternBlot方法测定肝癌干细胞中CD44蛋白的表达水平。
　　结果：
　　1.MTT结果显示:大豆黄酮、Mung、Gin和L08在不同的药物浓度和给药时间内对人肝癌细胞SMMC-7721的增值均有抑制作用，且浓度和抑制作用密切相关。
　　2.流式细胞术结果显示:大豆黄酮、Mung、Gin和L08处理人肝癌细胞SMMC-772124h后，CD44阳性细胞数目均少于未给药对照组。
　　3.WesternBlot结果显示:大豆黄酮、Mung和L08处理人肝癌细胞SMMC-7721后CD44蛋白表达水平均有降低，且剂量与表达水平相关。但Gin不能降低人肝癌干细胞SMMC-7721中CD44的表达。
　　结论：
　　1.大豆黄酮、Mung、Gin和L08均能抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖，并且抑制作用与浓度密切相关。
　　2.大豆黄酮、Mung、Gin和L08均能抑制人肝癌细胞SMMC-7721中CD44阳性细胞的生长。
　　3.大豆黄酮、Mung和L08均能降低人肝癌细胞SMMC-7721中CD44蛋白的表达，但Gin则不能降低人肝癌细胞SMMC-7721中CD44蛋白的表达。

目录

声明

摘要

1 引言

2 实验材料

2．1 癌细胞株

2．2 主要试剂

2．3 主要仪器

2．4 主要试剂配制

3 实验方法

3．1 人肝癌SMMC-7721细胞的培养

3．1．1 细胞的复苏

3．1．2 细胞的换液

3．1．3 细胞的消化与传代

3．1．4 细胞冻存

3．1．5 细胞计数

3．2 MTT法测定肝癌细胞SMMC-7721的增值率

3．2．1 实验分组

3．2．2 实验步骤

3．3 流式细胞术检测肝癌干细胞的增值率

3．3．1 实验分组

3．3．2 实验步骤

3．4 CD44蛋白的Western blot分析

3．4．1 总蛋白的制备及浓度测定

3．4．2 SDS-PAGE垂直电泳

3．4．3 转膜

3．4．4 抗体孵育

3．4．5 辣根过氧化酶-DAB法染色分析

3．5 统计学方法

4 实验结果

4．1 MTT法检测不同浓度的大豆黄酮、Mung、Gin和L08对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用

4．1．1 不同浓度的大豆黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用

4．1．2 不同浓度Mung对人肝癌细胞SMMC7721增殖的抑制作用

4．1．3 不同浓度Gin对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用

4．1．4 不同浓度L08对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响

4．1．5 不同浓度环磷酰胺对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响

4．2 流式细胞术检测不同浓度大豆黄酮、Mung、Gin和L08对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44阳性细胞的影响

4．2．2 不同浓度Mung对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44阳性细胞的影响

4．2．3 不同浓度L08对肝癌SMMG-7721细胞中CD44阳性细胞的影响

4．2．4 不同浓度Gin对肝癌SMMC-7721细胞中CD44阳性细胞的影响

4．2．5 不同浓度环磷酰胺对肝癌SMMC-7721细胞中CD44阳性细胞的影响

4．3 Western Blot测定大豆黄酮、Mung、Gin和L08对肝癌干细胞CD44表达的影响

4．3．1 大豆黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44表达的影响

4．3．2 Mung对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44表达的影响

4．3．3 Gin对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44表达的影响

4．3．4 L08对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44表达的影响

4．3．5 环磷酰胺对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44表达的影响

5 实验讨论

6 结论

参考文献

综述 CD44在肝癌及其它肿瘤中表达的研究

致谢

个人简历