细胞色素P450氧化还原酶基因多态性对其mRNA及活性的影响

摘要

研究背景:
　　细胞色素P450氧化还原酶(Cytochrome P450 oxidoreductase，POR)是存在于人肝微粒体中内质网膜上的一种黄素蛋白质。它传递电子给所有的微粒体细胞色素P450酶，进而实现个体对药物、致癌物等的代谢作用。目前还没有正常肝功能的中国人肝样本POR的详细报道。
　　目的:
　　本研究检测POR基因多态性、POR mRNA表达水平及POR活性，并分析POR基因多态性对POR mRNA表达水平及POR活性的影响。分析POR mRNA表达水平与POR活性的相关性及POR基因多态性对POR mRNA与POR活性相关性的影响。另外，分析人口学因素对POR mRNA、POR活性及两者相关性的影响，提供POR的生理数据。
　　方法:
　　POR基因多态性通过SnapShort进行分型分析。POR活性通过测定人肝微粒体中细胞色素C的还原来检测。POR mRNA表达水平通过荧光定量PCR方法测定，并以2-△Ct计算扩增结果。
　　结果
　　123例人肝样本POR基因8种SNP位点分型结果显示:POR基因SNP位点(rs17148944G＞A、 rs2302433C＞T、 rs1057868 C＞T、rs41301394C＞T、rs1135612A＞G、rs10954732G＞A、rs4732515T＞C、rs4732516C＞G)突变率分别为0.8％、6.9％、34.1％、34.1％、48.8％、50.8％、86.2％、86.2％。本研究样本中POR mRNA表达水平为0.047-1.25，差异26.6倍，中位数是0.28。125例正常肝功能的中国人每毫克微粒体中POR活性水平为26.91-125.77nmol/mgprotein/min，差异4.67倍，其中位数为56.05 nmol/mg protein/min。另外，125例正常肝功能的中国人每克肝组织中POR活性水平为215-12323nmol/gliver/min，差异57.23倍，其中位数为2152 nmol/g liver/min。
　　通过两种方法分析POR基因多态性分别对POR mRNA及POR活性的影响。首先，逐一分析POR基因单核苷酸多态性(SNP)对POR活性的影响，没有发现明显影响(P＞0.05)。然后，根据8种SNP，对POR基因进行单倍型分析，将123例样本分为14种单倍型，分析两两单倍型间的人肝中POR活性的差异性。结果显示:以每毫克微粒体为单位表示POR活性时，单倍型7(n=7)和单倍型8(n=8)相比，有4个SNP不同(rs1057868、rs41301394、rs4732515、rs4732516)，导致两种单倍型样本间每毫克微粒体中POR活性有显著差异(P=0.008)。单倍型1(n=24)与单倍型7(n=7)相比，有4个SNP不同(rs1057868、rs10954732、rs1135612、rs41301394)，导致两种单倍型样本间每毫克微粒体中POR活性有明显差异(P=0.011)。单倍型8(n=8)和单倍型10(n=36)相比，有3个SNP不同(rs1135612、rs4732515、rs4732516)，导致两种单倍型样本间每毫克微粒体中POR活性有明显差异(P=0.015)。单倍型10(n=36)与单倍型1（n=24）相比，有4个SNP不同(rs1057868、rs10954732、rs1135612、rs41301394)，导致两种单倍型样本间每毫克微粒体中POR活性有明显差异(P=0.028)。同样，单倍型6与单倍型11，单倍型8与单倍型11，单倍型1与单倍型11，单倍型6与单倍型8等两两基因型间每毫克微粒体中POR活性相比时，都表现出明显差异(P＜0.05)。而以每克肝组织为单位表示POR活性时，只发现单倍型7(n=7)分别与单倍型1(n=24)、单倍型6(n=6)相比时，每克肝组织中POR活性有明显差异(P＜0.05)。同样分析14种单倍型样本两两间POR mRNA表达水平的差异性。结果显示:单倍型3分别与单倍型1、单倍型7、单倍型8、单倍型10相比时，POR mRNA表达水平具有明显差异(P＜0.05)。
　　另外，分析POR mRNA与POR活性的总相关性，并分析POR基因多态性对POR mRNA与POR活性相关性的影响。结果显示:POR基因rs1057868位的基因型为TT纯合子突变的样本(n=11)，POR mRNA与POR活性明显相关(r=0.675，P=0.023)。POR基因rs41301394位的基因型为TT纯合子突变的受试者(n=11)，POR mRNA与POR活性明显相关（r=0.675，P=0.023）。单倍型8(rs1057868-rs4732516: TC-G-A-G-C-CT-TC-CG)(n=6)的POR mRNA与POR活性明显相关(r=0.885，P=0.019)。
　　人口学因素分析结果显示，年龄、性别对POR活性没有明显影响，吸烟(P=0.044)和饮酒(P=0.013)明显降低POR活性。而年龄、性别、吸烟、饮酒对POR mRNA表达水平均没有影响。男性的POR mRNA表达水平与POR活性明显相关(r=0.384，P=0.036)，吸烟的样本POR mRNA表达水平与POR活性明显相关(r=0.658，P=0.028)。
　　结论:
　　1.POR基因突变明显影响POR mRNA表达水平及POR活性。
　　2.吸烟和饮酒明显降低POR活性。
　　3.POR mRNA表达水平与POR活性总体没有明显相关性。
　　4.男性的PORmRNA表达水平与POR活性明显相关(r=0.384，P=0.036)。吸烟者的PORmRNA表达水平与POR活性明显相关（r=0.658，P=0.028）。
　　5.我们建立了从大量人肝样本得到的POR生物学数据，这些数据为研究中国人群的CYP酶对药物代谢的药代动力学提供了基本有用的信息。

目录

声明

摘要

中英文对照缩略表

1 引言

2 实验材料

2．1 人肝标本

2．2 化学试剂

2．3 仪器设备

2．4 溶液配制

3 实验方法

3．1 人肝微粒体POR活性的测定

3．2 人肝组织中PORmRNA表达水平的测定

3．3 POR基因型的测定

3．4 统计分析方法

4 实验结果

4．1 125例正常肝功能的中国人POR活性水平与个体差异

4．2 125例正常肝功能的中国人POR mRNA表达水平与个体差异

4．3 PORmRNA表达水平及活性的相关性

5 讨论与分析

6 结论

参考文献

综述 细胞色素P450氧化还原酶的相关研究的概述

个人简历

致谢