抑制Wnt/JNK信号通路在逆转P-糖蛋白调控的结肠癌多药耐药中的作用

摘要

背景与目的:
　　结直肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤，占消化道新发肿瘤的40％左右，发病率逐年递增。化疗是晚期结直肠癌病人综合治疗中最主要的治疗措施，但是最终的化疗效果受多药耐药(multidrugresistance，MDR)的严重限制。MDR是导致化疗失败的最主要因素之一，MDR使肿瘤细胞对包括抗肿瘤药物和抗病毒药物在内的结构不同、功能不同的药物均产生耐药性，影响化疗疗效，最终导致化疗失败及预后不良。尽管已有不少研究表明JNK信号通路可介导P-gp调控肿瘤多药耐药，Wnt/JNK信号通路与肿瘤的发展、转移和侵袭及新生血管形成密切相关，但是Wnt/JNK信号通路与P-gp调控的结肠癌多药耐药的关系尚不清楚。
　　本文旨在探讨结肠癌多药耐药细胞株HCT-8/VCR(vincristine)中Wnt/JNK的表达情况;该通路与P-gp表达的变化关系，以探讨Wnt/JNK信号通路与结肠癌MDR的可能关系。
　　方法:
　　1.人结肠癌敏感细胞株HCT-8及人结肠癌耐药细胞株HCT-8/VCR在37℃、5％CO2、饱和湿度条件下置于含10％胎牛血清的RPMI1640完全培养液中，常规培养。人结肠癌耐药细胞株HCT-8/VCR中加入终浓度为2mg/L的长春新碱(VCR)以维持耐药性，其在无药培养2w后开始实验。
　　2.分别检测敏感株HCT-8和耐药株HCT-8/VCR中蛋白Wnt11、c-Jun、p-c-Jun及P-gp的表达，分析表达水平的变化。
　　3.分别检测加入Wnt/JNK信号通路抑制剂(WIF-1)干预Wnt/JNK后，人结肠癌敏感细胞株HCT-8WIF-1及人结肠癌耐药细胞株HCT-8/VCRWIF-1中蛋白Wnt11、c-Jun、p-c-Jun及P-gp的表达，分析表达水平的变化。
　　4.以均数±标准差（(x)±s）表示所有数据，采用SPSS软件15.0进行统计分析。两组独立样本的比较采用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。
　　结果:
　　1.人结肠癌多药耐药细胞株HCT-8/VCR及其敏感株HCT-8中均有Wnt11、c-Jun、p-c-Jun三种蛋白的表达，两株细胞中存在Wnt/JNK信号通路。
　　2.人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR中Wnt11、c-Jun及p-c-Jun的表达水平均较敏感细胞HCT-8高，两株细胞中对应的三种蛋白的表达水平变化趋势相一致;HCT-8/VCR中P-gp的表达水平较HCT-8中高，并随着Wnt11、c-Jun及p-c-Jun的表达水平变化而变化且趋势一致;Wnt/JNK信号通路在耐药细胞中活化程度较敏感细胞中增强，与P-gp的表达水平正相关。(P＜0.05)
　　3.加入WIF-1后HCT-8/VCRWIF-1和HCT-8WIF-1中Wnt11、c-Jun、p-c-Jun及P-gp的表达水平无明显差异，两株细胞的耐药程度相当，Wnt/JNK信号通路的活化程度亦相当，无统计学差异。(P＞0.05)
　　4.加入Wnt/JNK信号通路抑制因子WIF-1后，HCT-8/VCR中Wnt11、c-Jun、p-c-Jun的表达水平明显下降;P-gp的表达水平明显降低，HCT-8/VCR的耐药性受到明显抑制，得到逆转。（P＜0.01）
　　5.加入Wnt/JNK信号通路抑制因子WIF-1后，Wnt11、c-Jun、p-c-Jun及P-gp的表达水平在人结肠癌敏感株细胞HCT-8中变化不大，与结果3和4比较可知，Wnt/JNK信号通路在耐药细胞中被抑制程度较明显，在敏感细胞中变化不大;且耐药细胞中Wnt/JNK信号通路被抑制后Wnt11、c-Jun、p-c-Jun及P-gp的表达水平与敏感细胞被抑制前后四种蛋白表达水平相当，即三株细胞的耐药程度相当。
　　结论:
　　1.抑制Wnt/JNK信号通路能逆转P-gp介导调控的结肠癌多药耐药。
　　2.Wnt/JNK信号通路能为逆转结直肠癌多药耐药提供新的治疗靶点。

目录

声明

摘要

英文缩略词索引

引言

材料和方法

1 材料

2 方法

3 免疫细胞化学法

4 设置阴性对照组

5 图像的分析

6 统计学分析

结果

讨论

结论

参考文献

综述 结直肠癌新药发现的研究进展

个人简历、在校期间发表的论文

致谢