ABCC4基因在NK/T细胞淋巴瘤中的表达和意义

摘要

背景:
　　NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)是恶性淋巴瘤的一种亚型，高发于亚洲和南美洲人群。在发病机制、诊断分型及临床治疗上都比较复杂。早期肿瘤比较局限，但可以很快发展至全身。具有侵袭性高，病程进展快，生存期短，对含蒽环类化疗方案耐药和预后差等特点。因此，寻找其发病原因及耐药机制十分必要。
　　目的:
　　1.检测ABCC4基因在NK/T细胞淋巴瘤细胞株和组织中的表达情况。
　　2.探讨ABCC4基因表达情况和临床疗效的关系。
　　3.构建ABCC4基因高表达和干扰表达慢病毒载体，进一步检测其表达量对NK/T细胞淋巴瘤的影响。
　　方法:
　　1.利用数字基因表达谱（digitalgeneexpression，DGE）技术和耐药相关基因PCR基因芯片技术初步检测出ABCC4基因在NK/T细胞淋巴瘤细胞株中的表达情况。
　　2.应用实时荧光定量PCR(Realtime-PCR)技术检测NK/T细胞淋巴瘤SNK-6、YTS细胞株与正常NK细胞ABCC4基因的表达情况。
　　3.免疫组织化学法(IHC)检测110例组织标本其中NK/T细胞淋巴瘤(60例)组织及鼻炎和鼻息肉组织（50例）中ABCC4基因蛋白表达水平。
　　4.根据ABCC4基因mRNA序列，设计二个靶向ABCC4基因的靶点，设计shRNA序列。设计引物，PCR扩增ABCC4基因cDNA序列，测序鉴定，构建慢病毒载体pCDH-ABCC4和pLL3.7-ABCC4-siR。制备出重组慢病毒Lenti-ABCC4和Lenti-ABCC4-siR。
　　5.通过Realtime-PCR和Westernblot技术评价感染慢病毒后的NK/T细胞淋巴瘤细胞株ABCC4基因表达情况，同时筛选出沉默效率最高的shRNA。
　　6.CCK-8实验和流式细胞术实验检测不同药物作用于正常表达及高表达和低表达ABCC4基因NK/T细胞淋巴瘤细胞株的敏感性。
　　结果:
　　1.实时荧光定量PCR(Realtime-PCR)技术和免疫组织化学法结果显示，与正常NK细胞相比较，ABCC4基因在NK/T细胞淋巴瘤细胞株和组织上高表达，其表达量的高低和临床疗效呈负相关。
　　2.成功构建了慢病毒表达载体pCDH-ABCC4、pLL3.7-ABCC4-siR，并制备出重组慢病毒Lenti-ABCC4和Lenti-ABCC4-siR，筛选出有效的干扰重组病毒，感染NK/T细胞淋巴瘤细胞株后能有效提高和降低ABCC4基因的表达。
　　3.降低ABCC4基因的表达能提高NK/T细胞淋巴瘤细胞株对不同化疗药物的敏感性。
　　结论:
　　1.多药耐药相关蛋白基因4（ABCC4基因）在NK/T细胞淋巴瘤中高表达。
　　2.成功制备出重组慢病毒Lenti-ABCC4和Lenti-ABCC4-siR能有效提高和降低ABCC4基因在NK/T细胞淋巴瘤细胞株中的表达。
　　3.降低ABCC4基因在NK/T细胞淋巴瘤细胞株中的表达量，可以提高化疗药物的作用效果。

目录

声明

摘要

英文缩写词索引

前言

第一部分 ABCC4基因在NK／T细胞淋巴瘤细胞株和组织中的表达情况及与临床疗效的关系

材料和方法

结果

讨论

第二部分 ABCC4基因高表达和干扰表达慢病毒载体的构建及NK／T细胞淋巴瘤细胞株感染效率测定

材料和方法

结果

讨论

第三部分 化疗药物对ABCC4基因不同表达量NK／T细胞淋巴瘤细胞株YTS的作用

材料和方法

结果

讨论

全文结论

参考文献

综述 ABCC4／MRP4基因、ABCC5／MRP5基因和恶性肿瘤

个人简历及在校期间发表论文

致谢