新复合杂合突变致17α-羟化酶缺陷症1例家系研究

摘要

背景：
　　17α-羟化酶/17,20-裂链酶缺陷症是先天性肾上腺皮质增生症（congenital adrenal hyperplasia，CAH）的一种罕见类型，其由于CYP17A1基因突变导致P450c17酶功能缺陷，从而产生高血压、低血钾、男性假两性畸形或女性性幼稚等临床症状。人类CYP17A1基因位于第10号染色体长臂（10q24.3），它共有8个外显子，编码508个氨基酸。目前人类基因突变数据库中（http://www.hgmd.org/）已发现90余种不同的CYP17A1的基因突变类型。国内外对17α-羟化酶缺陷症的研究主要集中在两方面：1.通过对CYP17A1基因进行基因测序，在确定基因突变位点后，通过构建含有突变位点的重组体，从细胞水平鉴定基因突变位点对P450c17酶蛋白功能的影响；2.利用各种生物信息学软件以及信息资料库构建P450C17的计算机三维结构模型，从而预测分析基因突变位点对蛋白的空间结构及功能的影响。
　　目的：
　　该研究的目的是研究我院收治的一例17α-羟化酶/17,20-裂链酶缺陷症患者的CYP17A1基因突变类型。
　　对象及方法：
　　1．先证者：15岁，社会性别为女性，基因型46，XY，郑州大学第一附属医院于2013年收住院，患者表现为原发性高血压、假两性畸形和外阴女性幼稚型。患者血 ACTH水平升高，但血、尿皮质醇水平明显降低；性激素六项显示血FSH、LH水平升高，而雄激素、雌激素水平均明显降低；且硫酸脱氢表雄酮、17α-羟孕酮水平亦明显降低。在患者及其家属知情同意下，同时抽取患者及其父母、祖父母、外祖父母外周血各2ml。
　　2．用苯酚-氯仿-异戊醇抽提法提取患者及其家属全血基因组DNA。
　　3．聚合酶链式反应（PCR）扩增及PCR产物纯化和DNA测序：设计分别包含外显子1、外显子2和外显子3、外显子4、外显子5、外显子5、外显子6、外显子7、外显子8的7对引物，用ABI Verity96well PCR扩增仪分别扩增8个外显子及外显子和内含子连接区，并采用Syngene Gene Genius凝胶成像仪进行琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的纯度，用PCR产物纯化回收试剂盒（SK1141生工生物工程（上海）股份有限公司）进行 PCR产物回收，回收后产物用 ABI3730XL测序仪进行双向测序。一旦发现突变的存在，该基因组DNA的PCR片段将会被放大100倍并同时进行分析以排除基因多态性。
　　4．测序结果分析：测序结果与标准序列进行对比（Gene Bank ID：1586）。
　　结果：
　　1．同义突变：①第1外显子第46位密码子存在碱基替换（CAC→CAT， H46H）②第1外显子第65位密码子存在碱基替换（TCG→TCT,S65S）。
　　2．无义突变：患者第1外显子非编码区存在碱基替换（T→C）。
　　3．错义突变：第4外显子第236位密码子存在碱基替换（GTT→GAT），导致氨基酸 V236D，该突变来自于先证者母亲，其外祖父同样存在该突变，而其父亲、祖父母及外祖母为正常序列。
　　4．碱基缺失及移码突变：第6外显子第329位密码子发生碱基缺失移码突变（TAC→AA），并提前终止（418TGA）。该突变来源于先证者父亲，其祖父同样存在该突变，而先证者母亲、祖母及外祖父母为正常序列。
　　结论：
　　通过对先证者及其父母、祖父母、外祖父母基因分析，发现1个错义突变（V236D）和一个碱基缺失移码突变（Y329K,418X），均为杂合突变。其中Y329K,418X属于中国人群常见的突变类型之一。V236D尚未见有文献报道。通过这两种杂合突变，共同导致 P450c17酶发生功能改变，从而造成患者表现型的改变。

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中英文缩略词表

前言

材料与方法

1 一般材料

3 材料

4 试验方法

结果

1 PCR扩增产物检测

2 测序结果分析

讨论

1 17α-羟化酶缺陷症的临床诊断

2 17α-羟化酶缺陷症的分子遗传学检测

结论

附图

参考文献

综述: 17α-羟化酶缺陷症的研究进展

致谢

个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果