rhPTH(1-34)对兔下颌骨牵张成骨作用的实验研究

摘要

目的：
　　观察重组人甲状旁腺激素rhPTH(1-34)对兔单侧下颌骨牵张成骨的作用。为rhPTH(1-34)在牵张成骨领域的临床应用提供依据。
　　材料及方法：
　　选用40只SPF级日本大耳白兔（性别不限，体重2.0-2.5kg），随机分为对照组、 rhPTH(1-34)12.5μg/kg剂量组、 rhPTH(1-34)25μg/kg剂量组、rhPTH(1-34)50μg/kg剂量组，每组各10只，在实验动物右侧下颌体前磨牙前区、颏孔后区的下颌骨体部纵向断开并固定牵张成骨器，均建立右侧兔下颌骨牵张成骨模型。手术7天延迟期后，随即进入牵张期，速率为0.4mm/12h，连续牵张10天，延长下颌骨8.0mm。牵张期后进入固定期。各实验组自牵张期起根据给药剂量每天8点皮下注射相应剂量的rhPTH(1-34)溶解于2％热灭活标准兔血清1ml直至处死；对照组自牵张期期每天8点皮下注射0.9%生理盐水1ml。牵张手术结束后固定期的1周、3周分别处死实验组和对照组动物各5只，取出牵张侧下颌骨，通过牵张区局部标本进行大体观察、x线观察、HE染色及BMPs免疫组化分析，采用统计学软件spss17.0对所有的切片进行BMPs的光密度值统计分析，切取心肝肾等行常规病理检查。
　　结果：
　　1、实验动物全部耐受实验过程，未出现中途死亡。牵张器牢固稳定，兔右侧下颌骨成功延长8.0mm，右侧均出现偏颌及咬合紊乱。
　　2、大体观察：固定期第1周，实验组较对照组骨断端界限稍模糊，更能促进新生骨骨痂形成。实验组高剂量组新骨形成的质量和密度明显好于低剂量组。固定期第3周新生骨已具有一定的硬度，给药组较对照组牵张区骨组织更加致密且光滑。实验组随着给药剂量增加成骨质量更佳。
　　3、影像学观察：固定期第1周对照组骨断端中央可见明显透亮带、实验组随着剂量增加透亮带模糊。固定期第3周，对照组牵张间隙内可见逐渐致密组织，实验组随剂量增加骨小梁形成且数量逐渐增多，牵张区边缘逐渐与正常组织连续。X线表现可见实验组成骨质量较对照组高。实验组高剂量组成骨密度和骨边缘连续性强于低剂量组。
　　4、组织学观察：组织切片显示随着时间的延长和rhPTH(1-34)剂量的增大，牵张间隙内新骨愈加活跃，新生骨逐渐成熟。实验组50μg/kg剂量组骨成骨效果最优。
　　5、免疫组化观察：牵张区组织切片通过光密度分析仪分析后发现BMPs阳性染色区主要集中在成骨细胞、成纤维细胞及软骨细胞等处，牵张区两侧区域较中央区域深染色，对照组BMPs的阳性表达强于对照组。
　　6、各组实验动物处死后切取的心、肝、肾样本进行病理学观察，均无明显异常。
　　结论：
　　间歇性应用重组人甲状旁腺激素(1-34)对兔下颌骨牵张成骨的新骨形成具有促进作用。

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符号说明

引言

材料和方法

1 兔右侧下颌骨牵张成骨模型的建立

1.1 实验动物

1.2 实验主要药物

1.3 动物分组

1.4 观察指标

1.5 牵张成骨器

1.6 实验所需其余设备及材料

1.7 实验方法

2 术后动物基本情况及牵张区标本的获得

2.1 术后实验动物的基本情况

2.2 获取肝、脾、肾标本

2.3 牵张区标本的获得

2.4 标本的处理

结果

1 观察指标

1.1 临床观察

1.2 大体观察

1.3 影像学观察

1.4 组织学观察

1.5 免疫组化检测

2 统计数据分析

讨论

1 牵张成骨术模型选择的理论基础

1.1 牵张成骨术理论基础

1.2 实验动物模型的选择

1.3 实验动物模型稳定器期和牵张期

2 重组甲状旁腺激素（1-34）对兔下颌骨牵张成骨的作用

2.1 与促进牵张成骨过程相关的药物及细胞因子

2.2 重组甲状旁腺激素的药理作用

2.4 重组甲状旁腺激素牵张成骨的促进作用

结论

附图

参考文献

综述 牵张成骨新生骨评价方法的研究进展

致谢