乳腺肿瘤组织中NS基因表达和食管癌Eca-109细胞株RNA干扰的实验研究

摘要

目的：研究Nucleostemin(NS)基因在肿瘤组织中的表达情况，探讨不同恶性程度及不同组织类型乳腺肿瘤组织中NS基因表达量的差异及NS基因特异性RNA干扰对食管癌Eca-109细胞株增殖能力的影响。 方法：1.提取肿瘤组织RNA，用半定量RT-PCR方法检测肿瘤组织中是否有NS基因的表达；以GAPDH基因作内参照，分析NS基因在不同恶性程度、不同组织类型、不同TNM分期及有无远处转移的乳腺肿瘤中表达量方面的差异；2.用脂质体转染法将NS特异性siRNA表达载体PCDNA4/C-NS-silencer和其空载体PCDNA4/C-Vector转染人食管癌Eca-109细胞，分别用Zeocin抗生素筛选获得稳定整合有两种载体的阳性细胞克隆，扩大培养后提取细胞基因组DNA，通过PCR方法验证外源基因整合阳性，然后利用细胞计数法绘制细胞生长曲线；倒置显微镜下进行细胞形态学观察；利用MTT法测试细胞增殖抑制率；RT-PCR法检测NS基因表达量的变化。 结果：1.本实验检测出乳腺癌、直肠癌，食管癌、胃癌等多种肿瘤组织中有NS基因表达，而其相应正常组织中没有检测到NS基因的表达；恶性乳腺肿瘤组织中NS基因的表达量明显高于良性乳腺肿瘤，(P＜0.01)；NS基因的表达量与乳腺肿瘤分级有关，分级越高NS基因的表达量越高(P＜0.01)；NS基因的表达量与乳腺肿瘤TNM分期有关，TNM分期越高NS基因的表达量越高(P＜0.01)；NS基因的表达量与乳腺肿瘤有无转移有关，有转移组NS基因的表达明显高于无转移组(P＜0.01)；NS基因的表达量高低与乳腺肿瘤组织类型无关(P＞0.05)。2.与对照组比较，silencer组肿瘤细胞的生物学行为发生了显著的变化，细胞增殖明显减慢，细胞体积变小，形状变圆，核质比变小，胞膜边缘突起增多，细胞趋于分化；MTT法显示silencer组细胞的增殖速率明显降低，细胞增殖抑制率大于80﹪以上；RT-PCR法显示silencer组细胞NS基因表达量较对照组下降。 结论：本实验检测出乳腺癌、直肠癌，食管癌、胃癌等多种肿瘤组织中有NS基因表达，而其相应正常组织中没有检测到NS基因的表达；乳腺肿瘤恶性程度越高NS基因的表达量越高；体外培养食管癌Eca-109细胞Silencer组细胞体积变小，形状变圆，核质比变小，胞膜边缘突起增多；细胞的增殖率明显降低；细胞增殖抑制率大于80﹪，NS基因表达量下降。

目录

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前言

文献综述

第一部分：乳腺肿瘤组织中Nucleostemin基因表达的实验研究

第二部分：Nucleostemin基因特异性RNA干扰对食管癌Eca-109细胞株增殖能力的影响

讨论

结论

参考文献

致谢

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