脂质体槲皮素对Pristane诱导的系统性红斑狼疮样小鼠模型的效应

摘要

研究背景和目的：
　　系统性红斑狼疮作为一种自体免疫性皮肤病，发病率较高，涉及全身多个系统器官或组织，其中最常受累的器官是肾。患者血清中产生多种自身抗体，其中以ANA抗体、抗ds-DNA抗体、抗snRNP/Sm抗体为代表。目前SLE的主流治疗药物有糖皮质激素、免疫抑制剂类等。这些激素及免疫抑制剂的主要作用有减低T、B淋巴细胞功能，减少特异性自身抗体生成，抑制细胞因子产生等。但是以上药物的长期应用不可避免的带来一些严重毒副作用，如抑制生殖系统功能，增加肿瘤发生率，破坏造血功能等，导致正常的机体免疫功能受损。已知近百种水果、蔬菜和中草药中含有数量丰富的槲皮素。槲皮素及其衍生物最重要的生物活性有免疫调节，抑制炎症等，同时能够抑制补体过度激活，调节T细胞活化，减少B淋巴细胞生成自身抗体。其作为一种天然多酚类化合物几乎没有毒性，也没有一般药物的多种副作用，在疾病防治上明显优于其它药物。目前尚无脂质体槲皮素用于SLE防治的报道。本研究通过观察脂质体槲皮素对Pristane诱导的SLE样小鼠模型血清自身抗体表达水平及肾小球IgG蛋白沉积的影响，探讨脂质体槲皮素对系统性红斑狼疮的治疗效应。
　　方法：
　　24只健康BALB/c雌鼠，6-8周龄，SPF级，体质量19±2g，随机分为2组，即正常对照组（n=6只），造模组（n=18只）。造模组每只小鼠于实验第1天全部一次性腹腔注射Pristane0.5ml，正常对照组每只小鼠全部一次性腹腔注射生理盐水0.5ml。第3个月末检测造模组小鼠血清中ANA抗体表达水平以鉴定造模是否成功。从第4个月起，将造模成功的小鼠随机分为两组，即模型组（SLE组）和脂质体槲皮素组（LQ组），加上原来正常对照组（NC组）共三个组别。用苦味酸标记各组小鼠，饲喂全价营养颗粒饲料，供给二级动物饮水，全程均在河南省实验动物中心的IVC系统中词养。给药方案：脂质体槲皮素组小鼠从第4个月起使用8号灌胃针头按50mg·kg-1体重剂量给予脂质体槲皮素，每日一次。治疗期为5个月。第8个月末采集各组小鼠血清标本，ELISA法测定血清中三种自身抗体（ANA、抗dsDNA和抗snRNP/Sm抗体）的表达水平；另采集各组小鼠新鲜肾脏标本并制作冰冻切片，经羊多克隆抗小鼠IgG-FITC荧光抗体作用后，置于荧光显微镜下应用525nm滤光波长观察各组标本荧光强度并采集图像。
　　结果：
　　第3个月末造模组小鼠有1例死亡，共检测到有14只小鼠血清中ANA抗体表达水平相较正常对照组平均表达水平明显升高，p<0.05。第8个月末SLE组、LQ组及正常对照组小鼠均无死亡。SLE组有4/7只小鼠(57％)出现红斑，LQ组有1/7只小鼠(14%)出现红斑；NC组均无皮肤红斑出现，槲皮素治疗组小鼠皮肤红斑发生率低于SLE组，p<0.05。三组小鼠血清中ANA抗体（24.535±1.297,40.260±1.137,34.180±0.817）、Anti-dsDNA抗体(355.793±17.562,568.200±18.578,475.930±14.237)和Anti-snRNP/Sm抗体(14.802±0.824,21.965±0.675,18.970±0.376)表达水平差异具有统计学意义（F=51.791,39.745,30.411,p<0.001)。与SLE组小鼠相比，脂质体槲皮素组小鼠血清中三种自身抗体表达水平显著降低，p<0.01，但仍明显高于正常对照组，p<0.001。脂质体槲皮素组小鼠肾小球IgG沉积免疫荧光强度相较SLE组明显减弱，但仍强于正常对照组小鼠。
　　结论：
　　脂质体槲皮素能够降低Pristane诱导的系统性红斑狼疮样小鼠模型血清中的ANA、抗ds-DNA及抗snRNP/Sm抗体表达水平并减少肾小球内的IgG蛋白沉积，表明脂质体槲皮素对于诱导的系统性红斑狼疮样小鼠模型具有保护效应，有望在人类SLE的治疗中发挥作用。

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缩略词表

引言

实验材料与方法

1 实验材料

2 主要实验试剂和实验仪器

3 实验方法

结果

1 实验小鼠死亡与造模成功例数

2 治疗期结束后小鼠外观变化

3 治疗期结束时各组小鼠血清自身抗体表达水平

4 治疗期结束时各组小鼠肾小球IgG沉积情况

讨论

结论

参考文献

综述:系统性红斑狼疮的发病机理及治疗进展

个人简历

致谢