CIDE-B基因启动子甲基化及mRNA表达水平与超重肥胖的关系

摘要

目的：检测超重肥胖者和正常对照者外周血CIDE-B基因启动子序列甲基化水平及皮下和大网膜脂肪组织mRNA表达水平，探讨CIDE-B基因启动子区域甲基化程度及mRNA表达水平与超重肥胖的关系。
　　方法：纳入患者均来自于医院腹部手术患者，手术前测定身高、体重、腰围、臀围及基本的生化指标。排除孕妇、残障或精神障碍者、继发性肥胖者、恶性肿瘤患者及乙肝、艾滋病、结核等传染性疾病患者。采用2007年中国成人肥胖诊断标准，将研究对象分为超重肥胖组（BMI?24.0kg/m2）和正常组（18.5 kg/m2?BMI<24 kg/m2）。采用质谱法检测启动子甲基化，研究对象共116例，其中超重肥胖组66例，正常组50例，均于手术前抽取清晨空腹外周静脉血2ml，用EDTA-K2抗凝，经3000rpm离心10min分离血浆和细胞后于-80摄氏度冰箱保存待测；采用荧光定量PCR检测mRNA表达水平，纳入研究对象106例，其中超重肥胖组60例，正常组46例，研究对象在全麻情况下施行手术，打开腹膜分别取2g皮下和大网膜组织，并立即用无菌的生理盐水进行冲洗，装在2ml的冻存管内，置液氮中保存。用IBM SPSS Statistics21.0软件进行数据分析，组间差异采用两独立样本的t检验或Mann-Whitney U检验，计数资料采用?2检验，CpG位点甲基化水平对BMI的影响程度分析采用多重线性回归，皮下和大网膜脂肪组织目的基因表达量差异采用配对t检验或Wilcoxon符号秩和检验，检验水准α=0.05。
　　结果：
　　1、本次sequenom质谱法共检测出CIDE-B基因启动子序列21个CpG位点存在甲基化。两独立样本t检验结果显示，正常组与超重肥胖组间该基因各CpG位点甲基化水平差异无统计学意义；甲基化水平最高的是 CpG4.5（0.65±0.06），最低的是 CpG15（0.04±0.05）；多重线性回归结果显示，超重肥胖组BMI受CIDE-B基因CpG14位点甲基化水平影响，腰臀比受性别和CpG30位点甲基化水平影响。
　　2、皮下脂肪组织 CIDE-B基因 mRNA的相对表达量是大网膜脂肪组织的1.93倍（皮下脂肪组织△Ct=2.34±1.80，大网膜脂肪组织△Ct=1.40±1.04），配对t检验结果显示，差异有统计学意义；皮下脂肪组织中，60例超重肥胖者CIDE-B基因mRNA的相对表达量是46例正常者的0.84倍（正常组△Ct=0.88±1.48，超重肥胖组△Ct=1.14±1.16），两独立样本t检验结果显示差异无统计学意义；大网膜脂肪组织中，60例超重肥胖者 CIDE-B基因mRNA的相对表达量是46例正常者的1.72倍（正常组△Ct=2.22±1.55，超重肥胖组△Ct=1.44±0.99），两独立样本 t检验结果显示差异有统计学意义。
　　3、大网膜脂肪组织中，舒张压大于80mmHg的研究对象该基因的相对表达量是舒张压小于80mmHg的1.01倍，且差异有统计学意义；皮下脂肪组织中，TG含量高的研究对象目的基因相对表达量是TG含量低的1.20倍，差异有统计学意义；高HDL目的基因相对表达量是低HDL的0.76倍，差异有统计学意义；高LDL目的基因相对表达量是低LDL的1.11倍，差异有统计学意义。
　　4、多重线性回归结果显示，CpG19位点甲基化水平对目的基因 mRNA在大网膜脂肪组织中表达的影响有统计学意义，皮下脂肪组织中，CpG2位点甲基化水平对目的基因 mRNA表达的影响有统计学意义。
　　结论：CIDE-B基因启动子序列存在异常甲基化状态，且甲基化程度越高，BMI和腰臀比越小；CIDE-B基因的高表达可能导致TG含量升高，HDL水平降低，LDL水平升高；大网膜脂肪组织中超重肥胖者CIDE-B基因mRNA表达量高于正常组，提示内脏大网膜脂肪蓄积与肥胖关系更加密切；CIDE-B启动子甲基化水平越低，mRNA的表达量越高。

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中英文缩略词对照表

1前言

2材料与方法

2.1材料

2.2 方法

3 结果

3.1 研究对象一般情况

3.2 CIDE-B基因启动子序列甲基化情况比较

3.3脂肪组织总RNA提取

3.4 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增及溶解曲线

3.5荧光定量PCR检测CIDE-B基因的表达量

3.6 CIDE-B mRNA的表达与临床生化指标的关系

3.7 CIDE-B基因启动子甲基化对mRNA的表达量的影响

4 讨论

4.1 CIDE-B调控脂质代谢的机制

4.2 DNA甲基化在肥胖中的研究进展

4.3 检测DNA甲基化的常用方法

4.4 CIDE-B基因mRNA表达的相对定量检测

4.5 研究局限和不足之处

5 结论

参考文献

综述: CIDE家族蛋白与肥胖的关系

参考文献

个人简历

致谢